MCE 国际站:
Torin 1品牌:MedChemExpress (MCE)
货号:HY-13003
CAS:1222998-36-8
纯度:99.08%
存储条件:粉末 -20°C 3 年 4°C 2 年 溶剂中 -80°C 1 年 -20°C 6 个月
运输条件:美国大陆的室温
其他地方可能有所不同。
产品活性:Torin 1 是一种有效的 mTOR 抑制剂,IC50 为 3 nM。Torin 1 抑制 mTORC1/2 复合物,IC50 值在 2 和 10 nM 之间。Torin 1 有效诱导自噬 (autophagy)。
生物活性:Torin 1 是一种有效的 mTOR 抑制剂,IC50 为 3 nM。 Torin 1 抑制 mTORC1/2 复合物,IC50 值介于 2 和 10 nM 之间。 Torin 1 是一种有效的自噬诱导剂。 IC50 和目标:IC50:2-10 nM (mTORC1)、2-10 nM (mTORC2)、3 nM (mTOR)、0.6 μM (ATM)、1 μM (DNA-PK)、1.8 μM (PI3K-α)、 3 μM (hVPS34)[2] 体外 Torin1 (250 nM) 完全抑制增殖并导致 G1/S 细胞周期停滞,并且在野生型 MEF 中比 50 nM 雷帕霉素更大程度地减小细胞大小[1]。 Torin1 在 mTOR 和 PI3Kis 之间的选择性超过 800 倍,并且相对于除 DNA-PK[2] 之外的其他 PIKK 家族激酶具有很高的选择性。 体内:Torin1(20 mg/kg,腹腔注射)在 U87MG 异种移植模型中有效,并证明对肿瘤和外周组织中 mTOR 的下游效应子具有良好的药效学抑制作用<支持>[2]支持>。
体外:Torin1 (250 nM) 可完全抑制增殖并导致 G1/S 细胞周期停滞,并且在野生型 MEF 中比 50 nM 雷帕霉素更大程度地减小细胞大小[1]。Torin1 在 mTOR 和 PI3Kis 之间的选择性超过 800 倍,并且相对于 DNA-PK 以外的其他 PIKK 家族激酶具有很高的选择性[2]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。
体内:Torin1(20 mg/kg,腹腔注射)在U87MG异种移植模型中有效,并对肿瘤和外周组织中的mTOR下游效应物表现出良好的药效学抑制作用[2]。MCE尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。
动物实验:对于药效学实验,首先将 torin 1 粉末以 25 mg/mL 的浓度溶解在 100% N-甲基-2-吡咯烷酮中,然后在注射前用无菌 50% PEG400 以 1:4 的比例稀释。六周龄雄性 C57BL/6 小鼠在药物治疗前禁食过夜。通过腹腔注射给小鼠注射载体(10 小时)或 26(20 mg/kg,2、6 或 10 小时),然后在处死前 1 小时重新注射(CO2 窒息)。收集组织并在干冰上冷冻。将冷冻组织在冰上解冻,并在组织裂解缓冲液(50 mM HEPES,pH 7.4,40 mM NaCl,2 mM EDTA,1.5 mM 正钒酸钠,50 mM 氟化钠,10 mM 焦磷酸钠,10 mM β-甘油磷酸钠,0.1% SDS,1.0% 脱氧胆酸钠和 1.0% Triton,补充有蛋白酶抑制剂混合物片剂)中通过超声处理进行裂解。使用 Bradford 测定法测量透明裂解物的浓度,然后通过蛋白质含量对样品进行标准化,并通过 SDS-PAGE 和免疫印迹进行分析。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。
细胞实验:在第 0 天,将 96 孔板接种到每孔 500 个细胞中并培养过夜。在第 1 天,用适当的化合物处理细胞,然后在第 3-5 天进行分析。为了进行分析,将板在室温下孵育 60 分钟
向每个孔中添加 50 μL CellTiter-Glo 试剂,然后将板放在定轨振荡器上混合 12 分钟。在标准板光度计上量化发光。MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
激酶实验:为了产生可溶性 mTORC1,使用水泡性口炎病毒 G 假型 MSCV 逆转录病毒生成稳定表达 N 端 FLAG 标记 Raptor 的 HEK-293T 细胞系。对于 mTORC2,生成稳定表达 N 端 FLAG 标记 Protor-1 的 HeLa 细胞。两种复合物均通过在 50 mM HEPES、pH 7.4、10 mM 焦磷酸钠、10 mM β-甘油磷酸钠、100 mM NaCl、2 mM EDTA、0.3% CHAPS 中裂解细胞来纯化。将细胞在 4°C 下裂解 30 分钟,并通过微量离心(13,000 rpm)10 分钟去除不溶性部分。将上清液与 FLAG-M2 单克隆抗体-琼脂糖一起孵育 1 小时,然后用裂解缓冲液洗涤三次,用含有最终浓度为 0.5 mol/L NaCl 的裂解缓冲液洗涤一次。用 50 mM HEPES、pH 7.4、100 mM NaCl 中的 100 μg/mL 3× FLAG 肽洗脱纯化的 mTORC1。洗脱液可以分装并储存在 -80°C 下。激酶测定在 30°C 下进行 20 分钟,最终体积为 20 μL,由激酶缓冲液(25 mM HEPES,pH 7.4、50 mM KCl、10 mM MgCl2、500 μM ATP)和 150 ng 无活性 S6K1 或 Akt1 作为底物组成。通过添加 80 μL 样品缓冲液并煮沸 5 分钟来停止反应。随后,样本将通过 SDS-PAGE 和免疫印迹法进行分析。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。
IC50 & Target:mTOR 3 nM (IC50) mTORC1 2-10 nM (IC50) mTORC2 2-10 nM (IC50) ATM 0.6 μM (IC50) DNA-PK 1 μM (IC50) PI3K-α 1.8 μM (IC50) hVps34 3 μM (IC50) Autophagy