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CypK品牌:MedChemExpress (MCE)
货号:HY-134669
CAS:1610703-09-7
Synonyms:N-Cyclopropene-L-Lysine
纯度:98.30%
存储条件:Powder -20°C 3 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month
运输条件:美国大陆的室温
其他地方可能有所不同。
产品活性:CypK (N-Cyclopropene-L-Lysine) 是赖氨酸的环丙烯衍生物,通过基因编码扩增有效地整合到抗体中。CypK 是一个最小的生物正交柄,用于创建稳定的研究蛋白偶联物。
生物活性:CypK (N-Cyclopropene-L-Lysine) 是赖氨酸的一种环丙烯衍生物,可通过遗传密码扩展有效地整合到抗体中。 CypK 是用于创建稳定的治疗性蛋白偶联物的最小生物正交手柄[1][2]。 In Vitro:Guidelines(以下是我们推荐的方案。此方案仅提供一个指南,应根据您的具体需求进行修改)。
CypK assay< sup>[1](表达抗体):
1. 在含有 50 mL 表达培养基的 250 mL 烧瓶中解冻一小瓶 HEK 悬浮细胞,其中补充有 100 单位/mL 青霉素,100 μg/ mL 链霉素和 250 ng/mL 两性霉素 B。将细胞保持在 37 ℃、8% CO2 的加湿培养箱中,该培养箱配备 125 rpm 的摇床。转染前至少将细胞分裂至 0.3-0.5 x 106 个细胞/mL(每 2-3 天)。
2. 当密度为 2.5 x 106 细胞/mL 达到(分裂后 2-3 天),准备 100 mM CypK 的新鲜溶液。为此,称取 64 mg CypK,加入 2.5 mL 0.1 氢氧化钠,涡旋,向下旋转以回收所有未溶解的颗粒并进行超声处理。
3. 加入 2.5 mL CypK(100 mM 溶于 0.1 M NaOH)至42.5 mL 表达培养基,辅以抗生素。混匀,加入 250 μL 0.1 M HCl,用 0.22 μm 过滤器除菌。
4.用还原血清培养基将 50 μg HC 和 LC pKym1 质粒稀释至 2.5 mL。在另一管中,用还原血清培养基将 135 μL 转染试剂稀释至 2.5 mL。
5. 配制溶液 5 分钟后,混合质粒和转染试剂溶液,孵育 20 分钟,使形成
6. 同时,将 1.25 亿个细胞以目标密度在 500 x g 下离心 5 分钟,用含有 CypK 的表达培养基重悬并加入 DNA-转染试剂混合物。
7. 细胞孵育20小时后,加入250 μL试剂盒内含的转染试剂增强剂。
8. 加入CypK后6-7天从上清液中收获抗体(不更换培养基)表达时需要)。
体外:指导原则(以下是我们推荐的方案。该方案仅提供指导,应根据您的具体需要进行修改)。 CypK 检测 [1](表达抗体): 1. 将一小瓶 HEK 悬浮细胞在 250 mL 烧瓶中解冻,烧瓶中含有 50 mL 表达培养基,其中补充了 100 单位/mL 青霉素、100 µg/mL 链霉素和 250 ng/mL 两性霉素 B。将细胞置于 37 ℃、8% CO2 的加湿培养箱中,配有 125 rpm 的振荡器。转染前至少将细胞分裂至 0.3-0.5 x 106 细胞/mL(每 2-3 天一次),两次。 2. 当密度达到 2.5 x 106 细胞/mL 时(分裂后 2-3 天),配制新鲜的 100 mM CypK 溶液。为此,称取 64 mg CypK,加入 2.5 mL 0.1 氢氧化钠,涡旋,旋转以回收所有未溶解的颗粒并进行超声处理。3. 将 2.5 mL CypK(100 mM,溶于 0.1 M NaOH)加入 42.5 mL 添加了抗生素的表达培养基中。混匀,加入 250 µL 0.1 M HCl,并使用 0.22 µm 过滤器进行灭菌。4. 用减血清培养基将 50 µg HC 和 LC pKym1 质粒稀释至 2.5 mL。在单独的试管中,用减血清培养基将 135 µL 转染试剂稀释至 2.5 mL。5. 制备溶液五分钟后,混合质粒和转染试剂溶液并孵育 20 分钟,以使 DNA 和转染试剂之间形成复合物。 6. 同时,以 500 xg 的速度离心 1.25 亿个细胞,使其达到目标密度,持续 5 分钟,用含有 CypK 的表达培养基重悬,并加入 DNA 转染试剂混合物。 7. 孵育细胞 20 小时后,加入 250 µL 试剂盒中包含的转染试剂增强剂。 8. 加入 CypK 后 6-7 天从上清液中收获抗体(表达过程中无需更换培养基)。 MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。