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Phorbol 12-myristate 13-acetate品牌:MedChemExpress (MCE)
货号:HY-18739
CAS:16561-29-8
中文名称:佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯
(12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐
佛波酯
Synonyms:佛波酯
PMA
TPA
Phorbol myristate acetate
纯度:99.80%
存储条件:-20°C, 避光 *溶剂中:-80°C, 6 个月
-20°C, 1 个月(避光)
运输条件:美国大陆的室温
其他地方可能有所不同。
产品活性:Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 是一种佛波酯,是蛋白激酶 C (PKC) 和 SphK 的激活剂。Phorbol 12-myristate 13-acetate 是 NF-κB 激活剂。Phorbol 12-myristate 13-acetate 可诱导 THP-1 细胞分化 (已经经过 MCE 专业的生物实验验证)。
生物活性:Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 是一种佛波醇酯,是一种双重 SphK 和 蛋白激酶 C (PKC) 激活剂[1][2]。 Phorbol 12-myristate 13-acetate 是一种 NF-κB 激活剂。 Phorbol 12-myristate 13-acetate 诱导 THP-1 细胞分化[3][7]。 IC50 和目标:EC50:11.7 nM (PKC)[1] 体外: 为了检查 PKC 在 p38MAPK 磷酸化中的作用,用 PKC 激活剂 PMA (100 nM) 刺激细胞,该激活剂模拟 PKC 的天然激活剂 DAG 与 PKC 的 C1 区的结合。在两种细胞类型中观察到 PMA 对 p38MAPK 的磷酸化,类似于在 αT3-1 细胞中观察到的 GnRH,即缓慢持续激活(30 分钟时分别为 3.2 倍和 3.6 倍)。由 GnRH 和 PMA 激活的 PKCs 在 p38MAPK 磷酸化中发挥不同作用的矛盾发现可以用 PKCs 的不同定位来解释。 αT3-1 细胞中 p38MAPK 磷酸化的基础、GnRH- 和 PMA- 刺激由 Ca2+ 通过电压门控 Ca2+ 通道和 Ca 流入介导2+ 动员,而在分化的 LβT2 促性腺激素细胞中,它仅由 Ca2+ 动员[2] 介导。
THP-1 细胞通过在 PMA(200 ng/mL
1-5 天)存在下孵育分化成巨噬细胞样细胞(THP-1 巨噬细胞),从而导致以形态变化和细胞表面表达增加为特征的巨噬细胞样表型CD11 和 CD14[3]。
在单核细胞系 THP-1 中,根据粘附、增殖丧失、乳胶珠的吞噬作用,PMA 导致比 VD3 更分化的表型, 以及 CD11b 和 CD14[5] 的表达。 体内:PMA 是一种 PKC 激动剂,可逆转 5-羟基癸酸 (5-HD) 诱导的损伤。因此,mitoKATP 的激活通过 PKC 通路保护了 SOD 和 MDA 中的线粒体功能[4]。
体外:PMA (100, 200 ng/mL
1-5 天) 诱导 THP-1 细胞孵育分化成巨噬细胞样细胞 (THP-1 巨噬细胞),从而导致形态变化,即贴壁样的巨噬细胞样表型,且细胞表面 CD11b 表达增加[3][5]。 注意事项: 1. THP-1 倾向于高密度生长,需要偏高的密度维持较好的细胞状态,一般1:2 半换液或者补液来传代,少离心,尽量使用高质量血清。 2. 传代次数、细胞状态、细胞密度都可能会影响诱导效果。必要时请调整细胞状态至较好时开展实验 (细胞形态饱满,大小均一,折光性较好,为悬浮生长单个细胞)。 3. PMA 使用时请注意避光储存 ,配成 DMSO 母液后分装冻存,避免反复冻融。 4. 如何判断实验成功:最直观的就是细胞由悬浮生长变成贴壁生长。 PMA (20 ng/mL,36 小时) 通过激活 PKC-δ/Syk/NF-κB 介导的 Thy-1 上调来抑制内皮细胞迁移[8]。 MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
体内:Phorbol 12-myristate 13-acetate 可用于动物建模,构建湿疹样模型。Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 是一种 PKC 激动剂,可逆转 5-羟基癸酸 (5-HD) 引起的损伤。因此,mitoKATP 的激活通过 PKC 通路保护了 SOD 和 MDA 中的线粒体功能[4]。
动物实验:大鼠[3] 所有实验均使用雄性Wistar大鼠(体重250~280 g)。将135只Wistar大鼠随机分为7组。(1)假手术组(n=21)大鼠于大脑中动脉闭塞(MCAO)前30 min向侧脑室注射0.9%生理盐水
(2)IR组(n=21)大鼠于大脑中动脉闭塞(MCAO)前30 min向侧脑室注射0.9%生理盐水
(3)甘珀酸(CBX)组(n=21)大鼠于MCAO前30 min向侧脑室注射CBX(5 μg/mL×10 μL)
(4)Sch-6783组(n=21)大鼠于MCAO前30 min侧脑室注射DZX(2 mM×30 μL)
(5)5-HD组(n=21)大鼠于MCAO前15 min侧脑室注射5-HD(100 mM×10 μL),10 min后注射DZX
(6)DZX+Ro组(n=15)大鼠于MCAO前15 min侧脑室注射DZX,10 min后注射Ro-31-8425(400 μg/kg)
(7)5-HD+PMA组(n=15)大鼠在注射5-HD和DZX后,腹腔注射PMA(200μg/kg)。MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
细胞实验:αT3-1 和 LβT-2 细胞在 37°C 加湿培养箱中以单层形式在 DMEM 中生长,培养箱中含有 5% CO2。在相同培养基中加入 0.1% FCS 进行血清饥饿处理 16 小时。然后按指示的时间添加 GnRH 和 PMA。通常,αT3-1 细胞通过 ExGen 500 或 jetPRIME 瞬时转染,而 LβT2 细胞仅通过 jetPRIME 转染试剂转染。对于显性负性 (DN) PKC 实验,αT3-1 细胞(在 6 厘米板中)用 1.5 μg p38α-GFP 和 3 μg 对照载体 pCDNA3 或 3 μg DN-PKC 构建体转染。对于 LβT2 细胞,转染是在 10 cm 板中使用 4 μg p38α-GFP 和 9 μg 对照载体 pCDNA3 或 9 μg DN-PKCs 构建体进行的。转染后约 30 小时,将细胞置于血清饥饿状态(0.1% FCS)16 小时,然后用 GnRH 或 PMA 刺激,用冰冷 PBS 清洗两次,用裂解缓冲液处理,然后进行一次冻融循环。收获细胞
离心(15,000×g,15 分钟,4°C)后取上清液进行免疫沉淀实验[2]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。
IC50 & Target:PKC 11.7 nM (EC50) NF-κB