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BODIPY 493/503品牌:MedChemExpress (MCE)
货号:HY-W090090
CAS:121207-31-6
Synonyms:Pyrromethene 546
BDP 493/503 lipid stain
纯度:99.63%
存储条件:4°C,密封保存,避光防潮 *溶剂中:-80°C,6个月
-20°C,1个月(密封保存,避光防潮)
运输条件:美国大陆的室温
其他地方可能有所不同。
产品活性:BODIPY493/503 是一种 BODIPY 染料。BODIPY 染料是一种具有强紫外吸收能力的小分子染料,其荧光峰比较尖锐,量子产率高。其对环境的极性和 pH 值相对不敏感,因此,在不同生理条件下相对稳定。由于其结构的非对称性,BODIPY 具有多种衍生结构产物。BODIPY 脂滴类染料可以很好的穿过细胞膜进入细胞内部,通过在细胞内的中性脂类上定位以进行特异性染色,因此,该染料可用于标记活细胞和固定细胞。最大激发/发射波长:493/503 nm。
生物活性:BODIPY 493/503 (Pyrromethene 546) 是一种荧光中性脂质染料(Ex/Em:493/503 nm)。 BODIPY 493/503 可以促进通过流式细胞术定量中性脂质含量和通过显微镜观察脂滴 (LD)[1]。 体外:指南(以下是我们推荐的方案。此方案仅提供指南,应根据您的具体需要进行修改)。
A. BODIY流式细胞术染色
1. 在与研究相关的培养条件下培养细胞。
2. 在感兴趣的时间点,在 PBS 中制备 2 μM BODIPY 染色液。每个样品所需的染色溶液体积对应于用于培养细胞的培养基体积。
3. 使用 3 mL PBS 快速冲洗细胞以去除培养基/血清。
4. 孵育BODIPY 染色溶液在 37°C 下避光 15 分钟。包括用于流式细胞术的未染色控制。 (注意:从这一点开始,尽可能避光保存样品)
5. 使用 3 mL PBS 快速冲洗细胞以去除染色液。
6. 胰蛋白酶消化细胞以产生单细胞悬液。
7. 加入 5 mL PBS 并将细胞悬液转移到 15 mL 锥形管中。
8. 以 250×g,5 分钟,4 °C 沉淀细胞。
9.吸出上清液,使用 3 mL PBS 快速冲洗细胞沉淀,并在 250×g、5 分钟、4°C 下沉淀细胞。
10. 小心吸出上清液并在 300 μL 1×flow 中重悬细胞细胞计数缓冲液。
11. 将细胞悬液通过 35 μM 滤器进入 FACS 管。
12. 进行流式细胞计数。每种条件至少获得 10,000 个事件。
13. 研究人员可以将数据分析为平均荧光或将数据显示为直方图[1]。
B. BODIY 染色显微镜检查
1. 在玻璃瓶中高压灭菌盖玻片。
2. 在组织培养罩中,将盖玻片放入 35 mm 细胞培养皿中。
3. 在 PBS 中制备 2 mg/mL 胶原蛋白溶液.
4. 用胶原蛋白处理盖玻片,促进细胞贴壁。向培养皿中加入 3 mL 胶原蛋白溶液,并在 37°C 下孵育 30 分钟。注意:使用镊子确保盖玻片与培养皿底部齐平,消除盖玻片下可能存在的任何气泡。
5. 吸出胶原蛋白溶液。
6. 用 PBS 清洗.
7. 将PBS加入培养皿中,置于培养罩中紫外光下灭菌。
8. 将细胞铺板到含有盖玻片的培养皿中。最佳细胞数应确定为在染色时达到 30-50% 的汇合度以允许正确成像。
9. 在与您的实验相关的培养条件下孵育。
10. 在时间- 兴趣点,在 PBS 中制备 2 μM BODIPY 染色溶液。
11. 用 3 mL PBS 洗涤细胞。
12. 在 3 mL 染色溶液中在 37 °C 下孵育 15 分钟。 (注意:从这一点开始,尽可能避免样品受光)
13. 在 3 mL PBS 中洗涤两次。
14. 在室温下将细胞固定在 3 mL 4% PFA 中 30 分钟。
15. 去除 4% PFA。
16. 在 PBS 中清洗样品 3×5 分钟。
17. 使用镊子将盖玻片安装到载玻片上。
18. 允许室温下过夜固化的封固液。
19. 载玻片可在 4°C 下保存或立即成像[1]。
Emission (Em):503
Excitation (Ex):493