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AF488 NHS ester品牌:MedChemExpress (MCE)
货号:HY-D1730
CAS:1374019-99-4
存储条件:请将产品存放在分析证书上推荐的条件下。
运输条件:美国大陆的室温
其他地方可能有所不同。
产品活性:AF488 NHS ester 是一种胺特异性荧光探针 (Em=525 nm)。AF488 NHS ester 在水和生物样品中,与巯基和胺反应,并在衍生化后改变它们的化学结构和荧光性质。
生物活性:AF488 NHS 酯是一种胺特异性荧光探针 (Em=525 nm)。 AF488 NHS 酯与水样和生物样品中的巯基和胺发生反应,然后在衍生化后改变其化学结构和荧光性质[1]。体外: i>AF488 NHS 酯的 IgG 荧光标记和抗 IgG 固相肽库筛选[2]
(1) 将冻干免疫球蛋白溶解在 50 mM 磷酸钠、20 mM 溶液中氯化钠和 PH 8.3,浓度为 5 g/L。
(2) 将 1 mg AF488 NHS 酯溶解于 100 µL 超干 DMF 中,加入 1 mL (1) 中的溶液,室温孵育 1 h。
(3) 使用配备 3-kDa MWCO 过滤器的 Amicon Ultra 0.5-mL 离心过滤装置收集样品。
(4)将脱保护的六聚体或四聚体文库用50 mM磷酸钠、150 mM氯化钠、PH 7.4(PBS)溶液洗涤,用5×沉降树脂体积洗涤3次至平衡。
(5) 用 50 mM 磷酸钠、150 mM 氯化钠、0.2% Tween (PH 7.4) 溶液稀释 IgG-AF488,直至终浓度为 1.3 mg/mL。
(6) 将(4)和(5)在2-8°C下孵育过夜。
(7) 用 50 mM 磷酸钠、150 mM 氯化钠、0.1% Tween 20、PH 7.4 (PBS-T) 清洗树脂珠。
(8) 将树脂沉积在 40 µL PBS-T 的 96 孔板中,每孔 1 个珠子,然后使用荧光显微镜在 10 倍放大倍数下成像。在480 nm激发下,以510 nm发射强度为阈值进行Alexa Fluor 488荧光测量和荧光筛选。
AF488 NHS 酯储存溶液[1]
用 DMF 制备 20 mM AF488 NHS 酯。
注意:AF488 NHS酯储存液建议分装后-20℃避光保存。
体外:AF488 NHS ester 的 IgG 荧光标记与抗 IgG 固相肽库筛选[2] (1) 将冻干的 IgG 以 5 g/L 的浓度溶解在 50 mM 磷酸钠、20 mM 氯化钠、PH 8.3 的溶液中。 (2) 1 mg AF488 NHS ester 溶于 100 µL extra dry DMF 中,加入 1 mL (1) 中溶液,室温旋转孵育 1 h。 (3) 用 Amicon Ultra 0.5-mL 离心式过滤装置,配有 3-kDa MWCO 过滤器收集样品。 (4) 六聚体或四聚体去保护文库在 50 mM 磷酸钠、150 mM 氯化钠、PH 7.4 (PBS) 溶液中以 5× 沉淀树脂体积洗涤三次以平衡。 (5) 用 50 mM 磷酸钠、150 mM 氯化钠、0.2% 吐温 (PH 7.4) 溶液稀释 IgG-AF488 至终浓度为 1.3 mg/mL。 (6) 将 (4) 和 (5) 在 2-8°C 下孵育过夜。 (7) 用 50 mM 磷酸钠、150 mM 氯化钠、0.1% 吐温 20、PH 7.4 (PBS-T) 洗涤树脂珠。 (8) 将树脂在 40 µL PBS-T 的 96 孔板中每孔沉积 1 个珠,然后使用荧光显微镜以 10 倍放大率成像。在 480 nm 激发下,以 510 nm 发射强度为阈值进行 Alexa Fluor 488 荧光测量和荧光筛选。 AF488 NHS ester 储存液[1] 用 DMF 配制 20 mM 的 AF488 NHS ester。 注:AF488 NHS ester 储存液建议分装后于 -20°C 避光保存。 MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。