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Cy5.5-SE品牌:MedChemExpress (MCE)
货号:HY-D0925
CAS:442912-55-2
Synonyms:Cyanine5.5 NHS ester
纯度:≥98.0%
存储条件:-20°C, sealed storage, away from moisture and light *In solvent : -80°C, 6 months
-20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)
运输条件:美国大陆的室温
其他地方可能有所不同。
产品活性:Cy5.5-SE (Cyanine5.5 NHS ester) 是一种 CY 染料。CY 为花菁 (Cyanine) 的缩写,是由奇数个甲基单位连接的两个氮原子组成的化合物。菁类化合物具有波长长、吸收和发射可调、消光系数高、水溶性好、合成相对简单等特点。CY 系类染料常被用于蛋白,抗体以及小分子化合物的标记,对于蛋白抗体的标记,可以通过简单的混合反应来完成结合,以下我们介绍了蛋白抗体标记的标记方法,具有一定的参考意义。储存方式:避光。
生物活性:Cy5.5-SE(Cyanine5.5 NHS ester)是一种CY染料。CY是Cyanine的缩写,是由奇数个甲基单元连接的两个氮原子组成的化合物。菁化合物具有波长长、吸收和发射可调、消光系数高、水溶性好、合成相对简单的特点[1]。CY染料常用于蛋白质、抗体和小分子化合物的标记。对于蛋白抗体的标记,通过简单的混合反应即可完成结合。下面我们介绍蛋白抗体标记的标记方法,具有一定的参考意义[2]。贮存:避光。
体外:原液制备 1. 蛋白准备 为了获得最佳标记效果,请将蛋白 (抗体) 浓度配制为 2 mg/mL。 1) 蛋白溶液 pH 值应为 8.5±0.5,若 pH 低于 8.0,则用 1 M 碳酸氢钠进行调整。 2) 若蛋白浓度低于 2 mg/mL,标记效率会大大降低,为了获得最佳标记效率,建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。 3) 蛋白必须在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 和铵离子的缓冲液中,否则会影响标记效率。 2. 染料准备 将无水 DMSO 稀释 CY 染料,制成 10 mM 储备溶液。通过玻璃管或旋涡充分混合。 注:CY 储存液建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存。 3. 染料工作液用量计算 标记反应所需的 CY 染料用量取决于要标记蛋白的用量,CY 染料与蛋白的最佳摩尔比为 10 左右。 例:假如所需标记蛋白为 500 μL 2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000),用 100 μL DMSO 溶解一管 1 mg CY 染料,则所需 CY 体积为 3.95 μL,详细计算流程如下 (以 Cy5.5-SE 为例) : 1) mmol (IgG) = mg/mL (IgG) ×mL (IgG) / MW (IgG) =2 mg/mL×0.5 mL / 150,000 mg/mmol= 6.7×10-6 mmol 2) mmol (Cy5.5-SE) = mmol (IgG) ×10 =6.7×10-6 mmol×10 = 6.7×10-5 mmol 3) μL (Cy5.5-SE) = mmol (Cy5.5-SE) ×MW (Cy5.5-SE) / mg/μL (Cy5.5-SE) = 6.7×10-5 mmol× 590.15 mg/mmol / 0.01 mg/μL =3.95 μL (Cy5.5-SE) 使用方法 1. 标记反应 1) 取算好体积的新鲜配制的 10 mg/mL CY 染料缓慢加入到 0.5 mL 蛋白样品溶液中,轻轻摇匀混合,然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀,防止蛋白样品变性失活。 2) 将该反应小管置于避光处,在室温条件下轻轻摇晃孵育 60 分钟,每隔 10–15 分钟,将反应小管轻轻颠倒几次,以充分混合两种反应物,提高标记效率。 2. 蛋白纯化脱盐 以下方案是使用 SepHadex G-25 柱纯化染料蛋白偶联物为例。 1) 按照生产说明书制备 SepHadex G-25 柱。 2) 将反应混合物装入 SepHadex G-25 色谱柱顶部。 3) 当样品运行到顶部树脂表面下方时,立即加入 PBS (pH 7.2-7.4)。 4) 向所需样品中加入更多的 PBS (pH 7.2-7.4),完成柱纯化。结合含有所需要的染料-蛋白质缀合物的组分。 MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
体内:Cy5.5 标记的因子 VIIa 是为肿瘤成像而开发的。用这些靶向蛋白标记的 Cy5.5 特异性定位于肿瘤异种移植物至少 14 天,但未结合的 Cy5.5 不定位于任何异种移植物或器官。这种对肿瘤 VEC 中的抗组织因子进行成像的方法可用于检测原发性肿瘤和转移灶,以及监测体内治疗反应[1]。与 Cy5.5 标记的乳铁蛋白结合的 pH/温度敏感磁性纳米凝胶(Cy5.5-Lf-MPNA 纳米凝胶)被开发为胶质瘤术前 MRI 和术中荧光成像的有前途的造影剂[2]。 MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。