RBM1-151 

RBM1-151, a 1-deoxy derivative and vinilog of RBM14-C12 (HY-150163), as a fluorogenic substrate of Amidases (HY-P2736) (E_x/E_m). RBM1-151 is hydrolyzed by acid ceramidase (AC) ((^appK_m = 7.0 μM; ^appV_max = 99.3 nM/min), N-acylethanolamine-hydrolyzing acid amidase (^appK_m = 0.73 μM; ^appV_max = 0.24 nM/min), and fatty Acid amide hydrolase (FAAH) (^appK_m = 3.6 μM; ^appV_max = 7.6 nM/min) but not by other ceramidases. RBM1-151 is applicable for basic biological studies of lipid amidase function, as well as potential diagnostic/prognostic evaluations of diseases involving dysregulated AC, NAAA, or FAAH (Farber disease, cancer)^[1][2].

RBM1-151 (20 μM，1 小时) 在无细胞系统中 (使用 A375/AC 细胞裂解液) 仅由酸性神经酰胺酶水解生成 RBM1-151-NH₂^[1]。
RBM1-151 (0-20 μM，30 分钟) 在酸性缓冲液中被 A375/AC 细胞裂解液 (20 μg) 水解，通过 Michaelis-Menten 分析计算的动力学参数为 ^appK_m = 7.0 μM 和 ^appV_max = 99.3 nM/min^[1]。
RBM1-151 (5 μM，3 小时) 在 HEK293/NAAA 细胞裂解液 (10 μg，过表达 NAAA) 中显示出比 HEK293/mock 裂解液更高的水解 (荧光产物)^[1]。
RBM1-151 (20 μM，3 小时) 在 Farber 病 (FD) 细胞 (缺乏 AC) 中产生极少荧光，而在 FD/AC 细胞 (过表达 AC) 中荧光显著更高 (在完整细胞中)^[1]。
RBM1-151 (20 μM，3 小时) 在 A375/AC 细胞 (过表达 AC) 中显示出比 A375/WT 细胞更高的水解^[1]。
指南 (以下是我们推荐的实验方案。此方案仅为指导，需根据具体需求进行调整。)
1. 细胞准备
1.1 悬浮细胞 (如 AML 细胞系：MM-6、HL-60)：在含 20% FBS 的 RPMI-1640 培养基中培养细胞；在分盘前调整细胞密度至每孔 2 × 10⁴ 个细胞。
1.2 贴壁细胞 (如黑色素瘤细胞系：A375/AC、C8161；HEK293)：在含 10% FBS 和 1% 青霉素/链霉素的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基 (高糖) 中培养细胞；在 96 孔板中每孔接种 2 × 10⁴ 个细胞，过夜孵育以确保细胞贴壁。
注意：对于需要抗生素筛选的细胞系 (如 A375/AC 使用布拉斯汀和潮霉素)，在实验前从培养基中移除抗生素以避免干扰。
2. RBM1-151 孵育与信号检测
2.1 向每孔加入 50 μL 20 μM RBM1-151 工作溶液 (配于含 20% FBS 的培养基中，最终 RBM1-151 浓度为 20 μM)。
2.2 在 37°C、5% CO2 条件下孵育 1 小时。
2.3 向每孔加入 25 μL 100% 甲醇终止反应。
2.4 立即向每孔加入 100 μL NaIO4 溶液 (2.5 mg/mL，配于 100 mM 甘氨酸-NaOH 缓冲液，pH 10.6)。 2.5 在 37°C、5% CO2 条件下避光孵育 30 分钟。
2.6 使用微量滴定板读数仪测量荧光信号；扣除仅含培养基和 RBM1-151 但无细胞的孔的背景信号。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

471.63

C₂₈H₄₁NO₅

3077081-47-8

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• [1]. Casasampere M, et al. A fluorogenic substrate for the detection of lipid amidases in intact cells. J Lipid Res. 2024 Mar;65(3):100520.  [Content Brief]

  [2]. Ciuffreda P, et al. Fluorescence-Based Enzyme Activity Assay: Ascertaining the Activity and Inhibition of Endocannabinoid Hydrolytic Enzymes. Int J Mol Sci. 2024 Jul 13;25(14):7693.  [Content Brief]