TO-PRO 1 

TO-PRO 1 is a DNA-binding fluorescent dye for non-living cells (Ex/Em=515 nm/531 nm). TO-PRO 1 can intercalate into base pairs of double-stranded DNA and produce stronger fluorescence. TO-PRO 1 is suitable for necrotic cells or late apoptotic cells with damaged cell membranes, showing green fluorescence under fluorescence microscopy or flow cytometry. TO-PRO 1 can be used to distinguish live cells from dead cells and distinguish cell membrane integrity. TO-PRO 1 can be attached to the surface of Feraheme (FH) nanoparticles (NPs) to obtain fluorescent dye-functionalized NPs for drug delivery studies^[1][2][3].

TO-PRO 1 (100 nM；15 min) 在 Jurkat 和 HT-29 细胞的流式细胞术实验中，与 Annexin V-Cy5.5 联合染色，可准确区分坏死细胞 (同时结合两者) 与活细胞 (仅显示红色自发荧光) ^[1]。
TO-PRO 1 (64.5 μg/mL；15 min) 在共聚焦显微镜实验中与 DAPI 共定位，并能够与 Camptothecin (HY-16560) 处理 Jurkat 细胞中被特异性绿色荧光标记的核 DNA 结合^[1]。
TO-PRO 1 (100 nM；15 min) 在藻类细胞 (如 Brachiomonas submarina 和 Tetraselmis suecica) 的活性检测中，反映的细胞死亡率比 5-CFDA-AM (HY-131131) 更准确^[2]。
TO-PRO 1 可用于直接测量活细胞和死细胞粘附硅藻^[3]。TO-PRO-1 只能染色死细胞，TO-PRO-1 染色海洋硅藻 Nitzchia closterium 后，在蓝色激发的落射荧光显微镜下，活细胞和死细胞分别被鉴定为红色和黄色细胞。活细胞因细胞内叶绿素发出的自发荧光而呈现红色，而死细胞因 TO-PRO-1 的荧光而呈现黄色^[3]。

TO-PRO 1 体外染色的实验方法和步骤^[1]：
1. 细胞制备
将细胞 (例如 Jurkat、HT-29 或藻类细胞) 悬浮于磷酸盐缓冲液 (PBS) 中，密度为 1×10⁵-1×10⁶ 细胞/mL。
使用 Camptothecin (HY-16560) (5 μM，10 h)、5-FU (HY-90006)/Oxaliplatin (HY-17371)或 γ 辐射 (致死剂量：2400-4800 Gy) 等处理诱导细胞坏死。
2. 染色方案
染料配制：将 TO-PRO 1 的 1 mM DMSO 储备溶液，用 PBS 稀释至 100 nM (用于哺乳动物细胞) 或 64.5 μg/mL (用于藻类细胞)。
样品孵育：将 5 μL 染料添加到 30 μL 细胞悬浮液中，轻轻混合，并在室温下黑暗中孵育 15 min。
清洗 (用于藻类细胞)：以 2,500 g 离心 2 分钟，丢弃上清液，并在新鲜的 PBS 中重新悬浮以减少背景荧光。
3. 检测方法
① 荧光显微镜法：使用带有蓝色滤光片的落射荧光显微镜 (激发：400-550 nm，发射：531 nm) 检测 TO-PRO 1 的绿色荧光。
计数至少 300 个细胞，需要区分死细胞 (亮绿色细胞核) 和活细胞 (藻类中的红色叶绿素自发荧光或哺乳动物细胞中无绿色荧光)。
② 流式细胞术法：使用 488 nm 的激发光，检测 530-550 nm 处的发射光。
根据前向/侧向散射和荧光强度设门细胞，以量化坏死细胞群。
4. 对照设置
阳性对照：100% 活细胞 (未经处理，预期 TO-PRO 1 结合率低)。
阴性对照：100% 非活细胞 (辐射杀死，预期 TO-PRO 1 结合率高)。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

645.38

C₂₄H₂₉I₂N₃S

157199-59-2

液体

Brown to red

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

Solution, -20°C, protect from light, 2 years

• [1]. Hoonsung Cho, et al. Fluorochrome-functionalized nanoparticles for imaging DNA in biological systems. ACS Nano. 2013 Mar 26;7(3):2032-41.  [Content Brief]

  [2]. Gorokhova E, et al. A comparison of TO-PRO-1 iodide and 5-CFDA-AM staining methods for assessing viability of planktonic algae with epifluorescence microscopy. J Microbiol Methods. 2012 Jun;89(3):216-21.  [Content Brief]

  [3]. Okochi M, et al. Fluorometric observation of viable and dead adhering diatoms using TO-PRO-1 iodide and its application to the estimation of electrochemical treatment. Applied microbiology and biotechnology 51 (1999): 364-369.