柠檬酸杆菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒

产品特点

即开即用：用户仅需提供待测DNA模板。

高灵敏度与特异性：

引物针对柠檬酸杆菌属保守序列设计，与其他微生物无交叉反应。

检测下限可达数百拷贝/反应。

双重检测功能：支持定性与定量分析：

定性：阳性对照Ct值≤30，阴性对照Ct值≥40；待测样品Ct值≤35判为阳性，≥40判为阴性，35-40需复测确认。

定量：通过标准曲线（Ct值与log浓度线性关系）计算样品DNA浓度，线性范围覆盖5个数量级。

一管式封闭检测：减少气溶胶污染风险。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 说明 |

| 2×qPCR MagicMix | 500 μL（棕色管） | 含荧光染料、dNTPs、耐热聚合酶 |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） | 用于样品稀释 |

| 柠檬酸杆菌属PCR引物混合液 | 100 μL（白盖） | 特异性引物对 |

| 阳性对照（1×10⁸ copies/μL） | 50 μL | 用于标准曲线绘制或质控 |

操作流程

样品制备：提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

反应体系配制（20μL/反应）：

2×qPCR MagicMix：10 μL

引物混合液：2 μL

DNA模板：2 μL

无核酸酶水：补至20 μL

PCR程序设置：

预变性：95℃ 5分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（此步骤采集荧光信号）

数据分析：

定量：根据阳性对照标准曲线计算样本浓度。

定性：依据Ct阈值判定阴阳性。

注意事项

实验安全：操作时需穿戴实验服、口罩及一次性手套。

质量控制：

阴性对照应无扩增（Ct≥40），阳性对照需呈现典型S型扩增曲线（Ct≤30）。

重复检测临界值样本（Ct 35-40）。

适用范围：仅限科研用途。

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