溶血隐秘杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 溶血隐秘杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Arcanobacterium haemolyticum Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3274 |
产品概述
本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，专用于检测溶血隐秘杆菌（Arcanobacterium haemolyticum）的核酸，适用于科研领域的定性及定量分析。试剂盒通过优化引物设计及反应体系，确保高灵敏度和特异性，靶基因通常选择溶血素基因（plo）或协同溶血因子（cAMP），以区分近缘菌种（如假结核棒状杆菌）。
核心特点
即开即用：用户仅需提供DNA模板，预混液含热启动Taq酶、dNTPs及优化缓冲体系。
高灵敏度：检测下限可达10拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。
严格特异性：引物经生物信息学验证，与溶血隐秘杆菌保守序列匹配，交叉反应风险极低。
质量控制：提供阳性对照，辅助区分假阴性结果。
兼容性：支持多种核酸提取方法，适配主流商业化提取试剂盒。
组分列表
| 组分名称 | 功能说明 | 规格/数量 |
| qPCR预混液 | 含荧光染料、酶及反应缓冲液 | 50次（20μL/反应）|
| 阳性对照 | 标准品DNA（梯度稀释用） | 1管（200 U/L） |
| 阴性对照 | 无核酸酶水 | 1管 |
| 标准品稀释液 | 用于建立定量标准曲线 | 20 mL |
操作流程
样本制备
DNA提取：使用常规方法或商业化试剂盒提取样本DNA，避免反复冻融（≤3次）。
标准品稀释（定量检测需执行）：
将阳性对照按梯度稀释（如200 U/L→100 U/L→50 U/L…），每个浓度独立分装以避免污染。
PCR扩增
反应体系配制（于冰上操作）：
预混液18 μL + 模板DNA 2 μL（总量20 μL/反应）。
阴性对照以无核酸酶水替代模板。
程序设置：
预变性：95℃ 5分钟；
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；
熔解曲线分析：60℃~95℃（0.5℃/秒）。
结果分析
定性检测：Ct值≤35且熔解曲线峰值单一判为阳性。
定量检测：通过标准曲线计算样本拷贝数。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制及扩增需在独立区域进行，防止交叉污染。
保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融；开封后建议分装使用。
适用范围：仅限科研用途，不适用于临床诊断。
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