检验原理
本试剂盒采用实时荧光定量PCR技术（染料法），通过特异性引物及荧光染料（如SYBR Green）对结核分枝杆菌复合群（MTBC）的保守基因序列（如IS6110插入序列和MPB64蛋白基因）进行扩增检测。荧光信号随扩增产物积累而增强，通过CT值判定样本中结核分枝杆菌的存在及载量。
产品名称 | 结核分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Mycobacterium tuberculosis Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3524 |
试剂组成
反应液：含PCR缓冲体系、dNTPs、荧光染料等（500μL×2管）
酶混合液：热启动Taq DNA聚合酶（50μL×1管）
阳性质控品：结核分枝杆菌DNA（50μL×1管，浓度1×10^8拷贝/μL）
阴性质控品：无核酸酶水（250μL×1管）
说明：不同批号组分不可混用。
储存条件及有效期
储存：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤5次）。
有效期：12个月。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI 7500
安捷伦 MX3000P/3005P
Roche LightCycler
Bio-Rad CFX系列
Eppendorf Mastercycler ep realplex
样本要求
痰液：晨起漱口后采集深部痰液，置于无菌容器。
肺泡灌洗液/脑脊液：无菌采集后立即送检。
咽拭子：专用拭子擦拭咽后壁及扁桃体，避免接触舌部，迅速放入保存液。
检测性能
检测限：1×10^3拷贝/mL
线性范围：2×10^3~1×10^8拷贝/mL
特异性：与常见呼吸道病原体无交叉反应。
操作步骤
DNA提取：使用兼容的核酸提取试剂盒提取样本DNA。
标准曲线制备（选做）：
将阳性质控品按10倍梯度稀释（10^8~10^3拷贝/μL），用于定量分析。
PCR体系配制（20μL/反应）：
反应液10μL + 酶液2μL + 模板DNA 2μL + 无核酸酶水6μL。
扩增程序：
预变性：95℃ 5分钟
循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，采集荧光信号）
熔解曲线分析（染料法需验证特异性）。
结果判读
阳性：CT值≤38且熔解曲线峰值与标准品一致。
阴性：无CT值或CT值>38。
注意事项
实验需分区操作（样本制备区、试剂配制区、扩增区），避免污染。
仅限专业医疗机构使用，结果需结合临床其他指标综合判断。
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