斯氏分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒基于实时荧光定量PCR技术，专用于斯氏分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis）的快速、高灵敏度检测。通过染料法荧光信号实时监测扩增过程，结合标准曲线实现模板定量分析，适用于科研用途。

产品特点

高灵敏度：可检测低拷贝数模板，检测限达1×10^2拷贝/μL。

特异性强：引物针对斯氏分枝杆菌基因组保守区域设计，避免交叉反应。

操作简便：预混PCR反应体系（含上样染料），用户仅需提供DNA模板。

质量控制：提供阳性对照（1×10^8拷贝/μL），便于结果判读及排除假阴性。

稳定性好：扩增效率＞95%，重复性误差＜5%。

检测原理

在PCR反应体系中加入荧光染料（如SYBR Green），其与双链DNA结合后释放荧光信号。通过实时监测荧光强度变化，结合标准曲线计算待测样本中斯氏分枝杆菌的DNA浓度。

试剂盒组分

PCR预混液（含热启动酶、dNTPs、缓冲液）

斯氏分枝杆菌特异性引物对

阳性对照（1×10^8拷贝/μL）

DEPC-H2O（无核酸酶水）

使用说明书

操作步骤

1. 样本DNA提取

使用兼容的核酸提取试剂盒制备待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

2. 标准曲线制备（样本制备区）

标记6管，依次编号7至2。

每管加45 μL DEPC-H2O，7号管加5 μL阳性对照，涡旋混匀（1×10^7拷贝/μL）。

依次梯度稀释至6号管（1×10^6拷贝/μL）、5号管（1×10^5拷贝/μL），直至2号管（1×10^2拷贝/μL）。

3. PCR反应体系配制（反应配制区）

按以下比例混合（单反应体积20 μL）：

预混液10 μL

引物混合液2 μL

模板DNA 2 μL

DEPC-H2O补至20 μL

4. 荧光定量PCR程序

预变性：95℃ 5分钟

扩增循环（40轮）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

结果分析

阈值线设定：取扩增曲线指数期荧光信号显著上升点。

标准曲线：以Ct值对拷贝数对数作图，线性回归R²≥0.99。

样本定量：根据标准曲线计算待测样本拷贝数。

注意事项

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

操作分区（样本制备、反应配制、扩增检测）避免交叉污染。

阳性对照需独立存放，稀释时更换带滤芯枪头。

储存条件

-20℃避光保存，有效期12个月；反复冻融≤3次。

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