蒽酮比色法的蒽酮比色法测定多糖含量

[a]多糖含有几百个或更多残基，但只有一个还原基团，因此它的还原能力极弱，对于他们的测定，应先将它们用酸水解成单糖组分。 蒽酮比色法是一种快速而简便的定糖方法，糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛及其衍生物，该衍生物与蒽酮发生反应，反应后溶液呈蓝绿色，于620nm处有最大吸收。因此可用此方法测定多糖含量。 [b]试剂 2g/L蒽酮试剂：溶解2g蒽酮于1L浓硫酸（98%的浓硫酸）中，当日配制使用。 0.01g/L葡萄糖溶液（可加几滴甲苯作防腐剂） 0.1g/L糖元溶液 [c]实验器材 试管及试管架 吸量管（1ml，5ml) 恒温水浴箱（100℃） 制冰机 紫外分光光度计 滴管 白瓷板 制作标准曲线 准确称取0.1g葡萄糖（分析纯），溶解并用蒸馏水定容至100ml后，分别取出1ml,2ml,3ml,4ml,5ml分别加入到50的容量瓶中，并用蒸馏水定容到50ml，配成浓度分别为20ug/ml,40ug/ml,60ug/ml,80ug/ml,100ug/ml,各取1ml于试管中，再加入3ml的蒽酮试剂，迅速浸入冰水中冷却，待几支试管均匀加完后，一起浸入100℃恒温水浴箱中，为防止水分蒸发，应在试管口上加盖一个玻璃球或者加一个塞子，自温度重新升至100℃起计时，准确保温10min后取出，用流动水冷却，然后，于室温中平衡片刻（约10min左右），在分光光度计上，波长620nm处，用0.5cm厚度的比色杯，以空白管做对照空白（此处的空白是指不加葡萄糖的蒽酮试剂，其他反应条件都一致），进行比色。 既得标准曲线。 如下表格 编号123456体积ml1（蒸馏水）11111浓度ug/ml020406080100 [d]样品测定 如上述条件一致，但要记得用除去蛋白质的样品溶液进行测定，否则会影响测定结果。 样品含糖量计算： C×V2×D 样品含糖量（%）=----------------------×100% W×V1×10 其中C----在标准曲线上查出的糖含量（ug), V2---提取液总体积（ml） V1---测定时取用体积（ml） D-----稀释倍数 W-----样品重量（g） 10-----样品重量单位g换算成ug的倍数 注意事项： 1.一定要注意温度要控制在100℃ 2.从100℃开始准确计时10min,然后迅速冷却，于室温中平衡10min. 3.蒽酮要注意避光保存。配置好的蒽酮试剂也应注意避光，当天配制好的当天使用。 4.试管要保证干燥清洁，无残留水滴。