蛋白质组学中三次生物学重复只有一次鉴定到的蛋白要怎么处理

要回答这个问题，首先需要理磁劳北调跳边解样品前处理需要达航到的目的：减少人为降解和修饰，并且尽量多的释放肽二者菜河对次有段。整个过程可以分为360问答以下流程：先从组织、体液或细胞中提取蛋白质，拿到蛋白混合溶液（根据你的研究目的，可以对法率话预蛋白先做分离，或者不分离），流口地低宁差盟式味接下来还原烷基化（还原的过程是将蛋白的二硫键打开，然后烷基化可以修饰巯基，防止游离的巯基再生成二硫键）处理，并酶解成肽段。1，样品的收集与保存组织样品1)对于人体手术切除的组织，有条件的话，最好用PBS（磷酸必年抗权树斯整委粮缓冲盐溶液，作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）取完之后直接去血。如果没有去血，可以-80℃液氮保存，干冰运输。2）对于小鼠、大鼠、兔子之类的组织样品，建议用灌流的花它难短注汽语谈收湖者方式来去血，尤其是像肝脏、胃、心脏这类大的组织，可以直接用灌流的方式去血，去得最干净。其次的方案是在后期剪碎的时候半鸡双案混去血。细胞样品常规实验，建议收到5*1E6~1E7个细胞以上的样品量（有些实验需要的样品量会少一些，后面会详细讲）。细胞取好后，首先用PBS清洗一下细胞表面，因为大部分培养基里面都含有血清，这部分血清得洗干净了先~如果是做分泌蛋白研究的话，首先用PBS清洗样品几次，再用条件培养基剧玉铁（不含有血清的培先养基）进行培养，根据细胞情况，大概12个小时以后，离心，去掉细胞碎片，取上清，就能提取到分泌蛋白了。血清样品1）血浆样品：可以通过医院常用的EDTA抗凝管进考济新派四民波知行收集，收集到的血浆会呈悬浮状态，离心去掉血细胞。2）血清样品：现在大部分研究都直接针对血清样品，它的成份更简单，没有凝集素，没有大量的血细胞，针对性会更强。收集血清样品时，直接把血清吸到管子里，室温静置让它凝结，上清黄色部分就是血清样品啦了面转。2，研磨或超声束逐晚破碎样品，为了减少人为操作引入的修饰，通常会准备大量的冰，进行冰上的操作。同时还需要加入蛋白酶抑制剂，防止在操作过程中蛋白被样品中自带的蛋白酶降解掉。3，充分熔接蛋白质，老氢游装端误病果客传侵如果蛋白没有充分溶解，能提取到的蛋白就会很少，达不到研究目的。4，充分解旋蛋白质，通常，蛋白质都是成球状的稳定状态，解旋蛋白质就是将球状蛋白中的二硫键打开，让它形成链状结构，以便进行下一步酶切。5，酶解蛋白质，一般会用多种酶对蛋白质进行酶解。6，去除杂质，我们要知道，质月何赵谱是一个非常灵敏的仪器，它检测的是多肽的质荷比。所有的盐类，以及所有会进额来念果行离子化的杂质，都会干扰到肽段的检测。所以我案映建紧二元局末巴磁某们会要求进入质谱之前的蛋白样品非常干净。在蛋白水平及肽段水平都会进行去除杂质的步骤。更详细的，下次再聊~