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一、目的 学习用阳离子交换树脂柱分离氦基酸的操作方法和基本原理。 二、原理 各种氨基酸分子的结构不同，在同一PH时与离子交换树脂的亲和力有差异，因此可依亲和力从小到大的顺序被洗脱液洗脱下来，达到分离的效果。 三、器材 1、20cmX 1cm层析管 2、试管 3、吸管． 4、恒压洗脱瓶 5、部分收集器 6、搪磁杯 7、电炉 8、分光光度计 四、试剂和材料 1、．苯乙烯磺酸钠型树脂（强酸 lx 8，l00一200目，可用上海华东化工学院产品） 2 、2 mol／L盐酸溶液 3、2mol／L****溶液 4、标准氨基酸溶液 天冬氨酸、赖氨酸和组氨酸均配制成 2 mg／mL的0.1M盐酸溶液。 5、混合氢基酸溶液将上述天冬氨酸、赖氨酸和组氨酸溶液按1：2．5：10的比例混合。 6、柠檬酸－****一盐酸冲液（pH5.8），钠离子浓度0 .45M） 取柠檬酸（C6O7H8.H20 ）14.25g、****9.30g和 浓盐酸 5．25 mL溶于少量水后，定容至 500 mL，冰箱保存。 7、显色剂 2 **合茚三酮溶于 75mL乙二醇单甲醚中．加水至 100 mL。 8、50%乙醇水溶液 五、操作 1、层析柱的准备：将强酸型阳离子交换树脂用****处理成Na+型后洗至中性（处理方法见第三篇实验十二）．搅拌一小时后装成一个直径1cm．高 16～18 cm的层析柱。 2、氨基酸的洗脱：用P H5.8的柠檬酸缓冲液流洗平衡交换住（装置如图）。调节流速为 0.5 mL／min，流出液达床体积的4倍时即可上样。由柱上端仔细加人氨基酸混合液0．25—0．5 mL，同时开始收集流出液。当样品液弯月面靠近树脂顶端时，即刻加入0.5 mL拧檬酸缓冲液冲洗加样品处。待缓冲液弯月面靠近树脂顶端时。再加入0．5 mL缓冲液。如此重复两次，然后用滴管小心注入柠檬酸缓冲液（切勿搅动床面），并将柱与洗脱瓶和部分收集器相连。开始用试管收集洗脱液，每管收集lmL．共收集60一80管。 3、氨基酸的鉴定：向各管收集液中加lmL水合茚三酮显色剂并混匀，在沸水浴中淮确加热15分钟后冷却至室温．再加15 mL的50％乙醇液。放置10分钟。以收集液第2管为空白，测定A570nm波长的光吸收值。以光吸收值为纵坐标，以柱洗脱体积为横坐标绘制洗脱曲线。以已知3种氨基酸的纯溶液为样品，按上述方法和条件分别操作，将得到的洗脱曲线与混合氨基酸的洗脱曲线对照．可确定3个峰的大致位置及各蜂为何种氨基酸。
