pcr扩增所用的试剂: p练翻刚cr扩增步骤: 1.细菌染色体DNA的提取(见上一组) 2.RAPD反应体系的配置(上图) 3·反应程序:将RAPD反应试剂加入EP管中 轻混后用100ul石蜡油覆盖于反应混合液之上,防止样品在反复加热-冷却的过程中蒸发,盖好盖子读结培超左。
打开PCR反应仪输入以下反应数据 · 94 摄氏度预变性5min · 94摄氏度变性40s · 40摄氏度退火40s · 72摄氏度延伸1min 将EP管放入仪器开始扩增,循环35次;72摄氏度延伸10min 注意事项: 1、PCR反应体系中DNA样品及各种试剂的用量都色指树海核极少,必须严格注意吸样孙承抗重小专但源量的准确性及全部放入反应体系中。2、为避免污非四培钢棉断城断派染凡是用在PCR反应中的Tip意鲜尖、离心管、蒸馏水都要灭菌里亮论静助负混沙;吸每种试剂时都要换新的灭菌Tip尖。3、加试剂时先加消毒三蒸水,最后套测易步加DNA模板和Taq DNA聚合酶。4、置PCR仪进行PCR反应前,PCR管要盖紧,否则使液体蒸发影响PCR反应。5、引物条件首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物与引物之间避免形成稳定二聚体或发夹结构,再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。