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氨基酸必须活化才能成为体内蛋白质合成的底物,氨酰-tRNA合成酶(ARS)催化这一反应,最终生成氨酰-tRNA。ARS对氨基酸和tRNA均有较高的专一性,反应分两步进行:(1)ARS催化氨基酸和ATP反应,生成氨酰-AMP-酶复合物,产生焦磷酸。(2)氨基酸从氨酰-AMP-酶复合物转移到tRNA,与tRNA的3'末端AMP中核糖的3'-OH形成酯键,生成氨酰-tRNA,并释来自放AMP和ARS,有的ARS直接将氨基酸连接于3'-OH,有的ARS先将氨基酸连接于2'-OH,再转移到3'-OH。氨基酸和tRNA之间形成的酯键是高能键,能量来自ATP水解。反应产生的焦磷酸水解成磷酸,也释放能量。每个氨基酸分子活化需要消耗两个高能磷酸键,使反应不可逆。