a. PBS或HBSS洗来自涤一次。
b. 如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴360问答得更牢。
c. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。
d. 用PBS或HBSS洗涤一次。
e. 加入含困重由谈历世简军别级势0.1% Triton 阶场占威操将X-100的PBS，冰浴孵育2分钟。
f. 转步骤5。 a. 收集细胞(不超过200万细胞)，PBS或HBSS洗涤一次。
b. 用4%多聚甲醛固定细胞30-60分钟。为防止细胞聚集成团，宜在侧摆摇床或水
平摇免片突床上缓慢摇动的同时进行固定。
c. 用PBS或HBSS洗涤一次。
d. 用含0.1% Triton X-100的PBS重悬细胞，冰浴孵育2分钟。
e. 转步骤5。 a. 二甲苯中脱蜡5-10分钟。换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。无水乙醇5分钟。90%乙造专皇然云航主醇2分钟。70%乙醇2分钟，蒸馏水2分钟。
b.滴加20μg/ml不含DNase的蛋白酶K，20-37℃作用15-30分钟(不同组织的最佳作用温度和时间需自行摸索)。
c. PBS或HBSS洗涤3次。注意：这一步必须把蛋白酶K夜保景细支带候曲洗涤干净，否则会严重干扰后续的标记反应。
d. 转步骤5。 a乐溶胞区者探混它含夜. 用4%多聚甲醛固定细胞30-60分钟。
b. PBS或HBSS洗涤2次，每次10分钟。
c. 加入含0.1% Triton X-100的PBS，冰浴孵育2分钟。
d. 转步骤5。 a. 用PBS或HBSS欢移洗涤2次。
b. 在样品上加50μl TUNEL检测液，37℃避光孵育60分汽候还月交力告灯主钟。注意：孵育时需注意在周围用浸足水的纸或药棉等保持湿润，以尽量减少TUNEL检测液的蒸发。
c. PBS或HBSS洗涤3次。
d. 用抗荧光淬灭封片液封片后荧光显帮烈冲讲频同微镜下观察。可以使用的激发波长范围为450-500nm，发射波长范围为515-565nm(绿色荧光)。 a. 用PBS或HBSS洗涤2次。
b. 加入50μl T附必UNEL检测液，37℃避光孵育60分钟。
c. PBS或HBSS洗涤2次。
d. 用250-5记阻祖各啊命伯的除脚证00μl PBS或HBSS悬浮。
e. 此时可以用流式细胞仪进行检测或涂片后在荧光显微镜下观察。可以使用的激发波长范围为450-500nm，发射波长范
围为515-565nm他责图(绿色荧光)。
