原发布者:zha轴乙宜倒木行北充位oguihong110
表达载体的构建方法及步骤一、载体的选择及如何阅读质粒图谱目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一个合格质粒的组成要素：（1）复制起始位点Ori即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。（2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+,Kan+（3）多克隆位点MCS克隆携带外源基因片段（360问答4）P/E启动子/增强子（5）Terms终止信号（6）加poly（A）信号可以起到稳定mRNA作用选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。载体选择主要考类候伟学虑下述3点：【1】样构建DNA重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合军乱孩适的克隆载体/表达载体。【2】.载体的类型：（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb选质粒。（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。（3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于孙苏支敌探妒卷模粉足球表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。【3】载体MCS中的酶切位点数与组成紧局门益销方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不能产生阅读框架错底们位。综上所述，选用质粒（最常用）做载体的5点要求：（1）选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不
