肌酸激酶（Creatine Kinase, CK）测定试剂盒说明书

微量法 100T/96S

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：
CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中，能可逆地催化肌酸与 ATP 之间的转磷酰基反应，在能量运转、肌肉收缩和 ATP 再生中有重要作用，是临床诊断心脑疾病的一个重要指标。

测定原理：

CK 催化磷酸肌酸和 ADP 生成肌酸和 ATP，己糖激酶催化 ATP 与葡萄糖形成 6-磷酸葡萄糖， 6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化 6-磷酸葡萄糖与 NADP+生成 NADPH，导致 340nm 光吸收值增加。自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂 1 瓶，4℃避光保存，使用前加 10mL 蒸馏水溶解。试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
工作液：临用前根据用量将试剂一和试剂二以 1:1 混合。使用前 37℃温育 2min。

粗酶液提取：

1. 组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g

组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 15min。

1. 血清样本：直接测定。

测定操作表：

1. 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 340nm。2．操作表

	空白管	测定管
酶液（μL）		60
工作液（μL）	150	150
H2O（μL）	150	90
混匀 ，取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中，空白 管调零，测定 340nm 的初始值A1， 37℃ 反应 3min，分别测定 1min，2min，3min 时的吸光值A2，计算时取平均值，△A = A2- A1。

注意：空白管只需测定一次。

相关图片：

CK 活性计算公式：
a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 按组织蛋白含量计算

酶活定义：37℃，pH7.0 时，每毫克蛋白质 1min 内催化产生 1nmolNADPH 为一个酶活单位。
DA
CK 活性（nmol/min/ mg prot）= e ´ d ×V 反总÷（V 样×Cpr）= 804×△A÷Cpr

1. 按组织样本质量计算：

酶活定义：37℃，pH7.0 时，每克样品 1min 内催化产生 1nmolNADPH 为一个酶活单位。
DA
CK 活性（nmol/min/g 鲜重）= e ´ d ×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）= 804×△A÷W

1. 按血清计算：

1. 按组织蛋白含量计算

1. 按组织样本质量计算：

1. 按血清计算：

注意事项：

1. 配制好的工作液 4℃稳定 7 天，请尽量配制后尽快使用。
2. 血清的 CK 不稳定，采集样本后尽快测定，4℃避光保存可稳定 24h。
3. 样品蛋白质含量需要另外测定，可选用 BCA 蛋白含量测定试剂盒进行测定。
4. OD 值大于 0.5 可用提取液适当稀释样品，并在计算公式中相应的改变稀释倍数。