Bradford 蛋白浓度测定试剂盒

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上海烜雅
国产/进口
2021-08-12 17:10

上海烜雅生物科技有限公司

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上海烜雅生物科技有限公司
黄经理
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产品属性
数量100
英文名Bradford Protein Assay Kit
CAS号详询
保质期详询
供应商上海烜雅生物科技有限公司
保存条件详询
规格200次
产品说明
Bradford 蛋白浓度测定试剂盒产品介绍:
组成包装(2500微孔)保存
5×G250染色液100ml2-8
PBS稀释液30ml2-8
蛋白标准(5mg/ml BSA)1ml-20
bradford蛋白定量试剂盒产品内容:

产品简介:
考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(Imax),由465nm变为595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM,但受略高浓度的去垢剂影响,需确保SDS的浓度低于0.1%Triton X-100低于0.1%Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用索莱宝生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明:
一.微孔酶标仪法1. 完全溶解蛋白标准品,取10ul,稀释至250ul ,使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用0.9%NaClPBS稀释标准品。 2. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取1ml 5×G250染色液,加入4ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。 3. 将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中,加PBS稀释液补足到20微升。 4. 将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。 5. 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液,室温放置3-5分钟。 6. 用酶标仪测定A595,或560-610nm之间的其它波长的吸光度。 7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。 二.分光光度计法 如无酶标仪,染色反应可在离心管中进行,反应液混匀后加入比色皿中,使用分光光度计测定吸光值。步骤如下: 1. 取八支(或者更多)干净的10ml离心管,标记上号。 2. 取100ulBSA加入PBS 2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml 3. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取10ml 5×G250染色液,加入40ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。

4. 按下表加入试剂(以每孔5ml计,多余的用来清洗比色皿)
离心管号1234567(样品管1)8(样品管2)9(样品管3)
标准蛋白BSA0ul100ul200ul300ul400ul500ul500ul适当稀释的样品1500ul适当稀释的样品2……
PBS500ul400ul300ul200ul100ul0ul0ul0ul0ul
1XG250染色液5ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml
5. 反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性,可每间隔2分钟加一管染色液,每间隔2分钟测一管OD值。如下表:
离心管号12345678……
加染色液(分钟)02468101214……
OD值357911131517……


此图为伯乐酶标仪680,单波长,570nm测得。室温反应三分钟


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