酶联免疫（ELISA）使用试剂盒检测过程中值得关注的问题
1、植物25羟基维生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)检测试剂盒酶标分析过程中的注意事项
样本的检测是基于抗原抗体的反应，根据标准曲线，判定样本最终的药物含量。它要求加样的准确性和洗板的一致性。在整个加样的过程中注意实验室温度的恒定，保证反应在试剂盒所示的温度下进行。
2常见加样方式
A、吸一打二
B、吸二打一
 在实际操作过程中，提倡用“吸二打一”用这种方式，有如下几个好处：
 a、加样过程中在板孔内不出现或者很少出现气泡
 b、提高加样速度，缩短前后样本反应的时间差。
在加样的过程中还应细心注意避免出现下列现象：
A、加样的过程中漏加或者重加；
B、加样的过程中忘记更换吸头；
C、样本的重加或者漏加；
D、忘记记录样本的加样顺序。
3植物25羟基维生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)检测试剂盒常见的洗板方式
A、洗板机洗板；
B、多道孔加样器洗板；
C、多孔吸头洗板；
在洗板的过程中，确保每孔所加洗涤液量的均一，按说明书操作，不可过多，避免溢出板孔，污染其它样本；过少，则达不到洗涤的效果，容易出现曲线不成线性，花板等情况。
4 甩板
 快速甩尽板孔内的液体，防止板孔里的液体对流或反溅回板孔中产生交叉污染。
5拍板
 轻轻的在吸水纸上扣干板孔内的液体，而且吸水纸只能使用一次。
6 显色
 值得注意的是，并非试剂盒中所规定的显色时间是绝对的，因为植物25羟基维生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)检测试剂盒的吸光度值会受环境中的温度、湿度、酶标板反应时所接触到的物品的导热度等有关，实验操作人员在加完显色液后，可根据颜色的深浅适当的延长或者缩短显色时间。防止出现吸光值接近或高于酶标仪的最高检测灵敏度（OD值在2.5-3.0之间），这样会间接影响到检测结果，如出现曲线前半部份梯度不明显或颠倒数值等现象，也就造成了一些假阳性或部分检测结果偏低的现象。
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