无缝克隆是一种简单、快速、高效的DNA定向克隆技术，该技术突破传统，不依赖内切酶和连接酶，不受限制性内切酶酶切位点的限制，利用同源重组的原理，可将任何DNA片段克隆至任何载体的任何位点。反应及转化时间短，阳性率达95%以上。
原理图示： 
产品特点：1．简单、高效地定向克隆DNA片段。
2．可同时定向克隆两个或多个DNA片段。
3．不依赖内切酶和连接酶，不受限制性内切酶酶切位点的限制。
4．省时，反应时间加转化时间短至20分钟。
5．PCR产物（仅有目的条带、无非特异条带和引物二聚体）可直接进行重组反应，无需纯化。
6．本制品足够20次20μL体系的无缝克隆。
7．本制品只能用于科研。
产品组成： 保存：-20℃，有效期1年。
自备试剂： 线性化载体、DNA片段、感受态细胞、SOC或LB培养基和培养皿(含抗菌素和不含的)。
使用方法：A．
线性化载体的制备： 可通过单酶切、双酶切或PCR扩增的方法来制备。（如果线性化不彻底，将会导致阴性克隆的产生，推荐使用双酶切或PCR扩增的方法。）
B．
DNA片段的制备：1．DNA片段可通过PCR扩增或酶切的方法制备，PCR扩增片段无需纯化即可用于重组反应。
2．PCR扩增法引物设计原则：引物的3‘端必须包含18～50个能与模板DNA结合的碱基序列，以便PCR扩增出目的DNA片段。引物的5‘端必须包含15～80个与线性化载体末端同源的碱基序列，以便PCR扩增片段能与线性化载体进行重组反应。
C．
重组反应：3．按照如下体系操作：
| 成分 | 用量 |
| 线性化载体 | 50～100ng |
| 自备的DNA插入片段 | X ng |
| 2×无缝克隆Mix | 10μL |
| 超纯水 | 至20μL |
注：目的片段与载体的摩尔比建议在2:1-3:1之间。
4．50℃反应15分钟，然后将离心管放置于冰上。如当天不进行转化实验，请将连接产物放-20℃保存。
注：当插入片段总和>5kb的时候，可适当延长孵育时间到30～50min。
D．
转化：5．取5μL连接液至50～100μL刚刚融化的感受态细胞中，轻轻混匀，冰浴2～30分钟。
6．42℃水浴热激30秒。
7．立即放置于冰上静置2分钟。
8．加入300～500μL无菌SOC或LB培养基（不含抗生素），37℃，200～250rpm振荡培养60分钟。
9．吸取200μL菌液涂板，为得到更多克隆，可先3000g离心2分钟，弃掉部分上清，用移液器轻吹菌体，至充分悬浮，取全部菌液涂板，然后37℃培养过夜（12～16小时）。
10．用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。
