l   产品规格

E.coli DH5α感受态细胞        100μl*10

l   储存条件

-80℃(12个月)

l   基因型

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

l   产品简介

本产品是采用大肠杆菌E.coli DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，实验室最常用的克隆感受态细胞，转化效率高，可用于蓝白斑筛选。

特点：1．DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒 DNA 的产量和质量。2．重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性。3．φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。DH5α菌株的缺点是生长缓慢，37℃需培 12-14 小时才能看见克隆。pUC19质粒检测，转化效率可达10⁸ cfu/μg DNA。

l   使用说明

1）. 取100ul感受态细胞置于冰浴中融化。

2）．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，静置冰浴30min。
3）．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中静置2-3min，该过程不要摇动离心管。
4）．每个离心管中加入450ul无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。
5）．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12~16h。

l   注意事项

1）．感受态细胞最好在冰中缓慢融化。

2）．混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3）．转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

*本试剂仅供实验室研究使用