简述
阿片-促黑素细胞皮质素原(pro-opiomelanocortin,POMC)是位于弓状核中重要的食欲调节肽,它是一种前体蛋白,经特异性蛋白酶水解后,会生成许多与能量平衡和食物调节相关的小分子多肽[1]。所以,本篇所述POMC抗体又名阿黑皮素原抗体,它可以特异性结合POMC前体蛋白,帮助解析其通过蛋白酶解生成多种激素(如调控能量代谢的α-MSH、参与应激反应的ACTH)的分子机制,进而用于检测POMC缺乏症等。

根据生产工艺与保存条件的区别,POMC抗体可以液体形式或是冻干粉形式出售。不过,考虑到生物药剂活性问题,它更多地是溶解于缓冲液中低温保存。
制备实例
文献报道了一种鸡POMC抗体的制备工艺。根据NCBI GenBank中报道的鸡阿黑皮素原(Pro-opiomelanocortin,POMC)一级结构信息,用TMHMM 2.0和DNA Star软件分析POMC蛋白的跨膜结构域,二级结构,疏水性,亲水性以及抗原性等,综合考虑抗体设计的其他因素,设计出1段12个氨基酸的多肽。将合成 后的多肽与牛血清白蛋白(albumin from bovine serum,BSA)偶联,用与BSA偶联的POMC多肽免疫新西兰兔,3个月后获取血清,亲和纯化出抗POMC多肽抗体。通过ELISA法检测效 价,Western blot和免疫组化法检测抗体特异性。通过该方法可以得到高效价与高特异性的鸡POMC抗体,ELISA法测定其效价可达到1:128 000,而且该抗体可用于免疫组化,说明所制备的鸡POMC抗体具有高特异,高效价等特点,将为鸡POMC基因的功能研究提供有用的研究材料[2]。
有关研究
近年来研究显示GnIH是一种负性调节生殖和刺激食物摄入的神经肽,POMC具有抑制食物摄取和刺激生殖的作用。同时研究还发现GnIH/RFRP-3具有抑制POMC神经元的作用,并且二者存在突触联系,而且GnIH/RFRP-3对POMC神经元的抑制作用,与GnIH/RFRP-3刺激食物摄取的效应相一致。但是GnIH/RFRP-3是否通过直接作用于POMC神经元而发挥调节作用,目前国内外研究较少。因此,研究人员选择POMC抗体,GnIH/RFRP-3抗体等通过免疫荧光法观察GnIH/RFRP-3与POMC在大鼠下丘脑神经元的表达,免疫共沉淀法(CO-IP)观察GnIH/RFRP-3与POMC是否存在相互作用,蛋白印迹法(Western Blotting)检测侧脑室微量注射GnIH/RFRP-3作用不同时间后大鼠下丘脑组织中POMC蛋白的表达变化情况,以此初步探讨GnIH/RFRP-3是否通过POMC神经元而发挥作用。
免疫荧光双标结果显示,GnIH/RFRP-3神经元与POMC神经元都为胞浆着色,GnIH/RFRP-3荧光为红色,POMC荧光为绿色,核仁为蓝色,GnIH/RFRP-3与POMC共表达于同一神经元。CO-IP结果显示,用POMC抗体与大鼠下丘脑组织裂解液总蛋白进行免疫共沉淀,免疫复合物电泳转膜后,分别用POMC抗体和GnIH/RFRP-3抗体进行免疫印迹,结果显示免疫复合物中含有POMC蛋白和GnIH/RFRP-3蛋白,且免疫印迹中出现条带与大鼠下丘脑组织裂解液中相应蛋白的条带位置一致。Western Blotting结果显示,组间比较,侧脑室微量注射GnIH/RFRP-3后20 min组大鼠下丘脑POMC蛋白表达量显著高于对照组(P<0.05),注射40 min组(P<0.05)差异无统计学意义,注射60,120,240和360 min实验组大鼠POMC蛋白表达显著低于对照组(P<0.05)。组内比较与20 min实验组相比,60,120和240 min组蛋白表达量依次呈下降趋势,360 min组蛋白表达量有升高趋势。但是,仍然低于20min组(P<0.05)差异有统计学意义。故可得出结论:GnIH/RFRP-3可能通过直接作用于POMC神经元而发挥作用[1]。
参考文献
[1]陈磊.GnIH对卵巢摘除术后补充雌激素大鼠下丘脑POMC神经元的影响[D].承德医学院.
[2]郎斌,朱弘焱,王佳美,等.鸡阿黑皮素原多肽抗体的制备与鉴定[J].畜牧与兽医, 2014(4):3.DOI:CNKI:SUN:XMYS.0.2014-04-024.