细胞增殖实验(Brdu法)

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细胞增殖实验(Brdu法)1.将盖玻片放入到2360问答4孔板中，将长满的大盘细胞用胰酶消化后，按1-2万个细胞/孔加入到24孔板中。2.待细胞长至50%-60%的密度后，更换培养液，导入相买件适道威粒束础理应质粒，4-6小时后更换培养液。3.培养24h后，于每孔板加入10µm的Brdu，继续培养4h。4.4％冷的多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。5.0.2％TritonX－100通透10分钟，PBS洗三遍。6.按1:1000稀释Brdu抗体，于每孔中加300µl，4度过夜后，PBS洗三遍。7.0.5ug/mlDAPI染核，然后直地院础算答音接照荧光片。8.蒸馏水洗掉问PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周。细胞爬片4%多聚甲醛固定20min（固定细胞器用预冷的70%甲醇组夜+30%丙酮）PBS漂洗3×5min伤于温派一尽拉图煤处0.5%Triton穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)PBS漂洗3×5min加入5%BSA稀释的Brdu，于4℃杂交过夜PBS漂洗3×5min10ug/mlDAPI染色2min抗淬灭封片剂封片

1.将盖玻片放入到24孔板中，将长满的大盘细胞用胰酶消化后，按1-2万个细胞/孔加入到24孔板中。2.待细胞长至50%-60%的密度后，取出细胞爬片，3.4％冷的多聚甲醛固定20分钟，PBS洗两遍。4.2NHCLinPBS(1:5用PBS稀释盐酸)室温10分钟5.neutralizebyincubatingthesamplesinboratebuffer(0.1M)for10minatroomtemperature.硼酸中和，PBS3次4.Blockingbuffer(5%BSA几艺速去全失或突宗,PBS,Tween-200.2%)。Goatserum10%5.Block回干海级航低ingbuffer