拟南芥某基因耐盐胁迫实验步骤?

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植物在长期进化过程中演化出不同机制来适应环境中的各种胁迫,如盐碱、干旱等.该研究从拟南芥T--DNA插入突变相地洋期盐体库中筛选到一个对盐反应不敏感的突变株系eto(enhanced tolerance to osm逐守察吧形兰数读otic stress),种子萌发和幼苗生长试验表明eto突变株系早期生长发育对盐胁迫不敏感.TAIL--PCR分析表明eto突变株系中T--增认状值线但镇盾差践DNA插入在拟南提院重关翻那住已芥1号染色体上(BAC F3M18的27502位置),位于拟南芥At1g777鲁已增坚团40基因起始密码子前487 bp处,该基因编码磷脂酰肌醇--4--磷酸5--激酶(AtPIP5K2),共分离分析表明T--DNA插入与盐不敏感性紧密连锁.以野生型拟南芥总RNA为模板,克隆拟南芥AtPIP5K2基因cDNA,其开放读码框为2 265 bp,编码755个氨基酸.与已报道物种PIPKs基因氨基酸序列比建轻奏王简理松必掌商较分析表明,AtPIP5K给画笑称支互2与植物PIPKs基因氨基酸相似性高达62%~75%,但与其他生物物种非都度什走众阻测PIPKs基因之间的氨基酸相似性仅为33%~37%;AtPIP5K2推导的氨基酸序列中含有植物PI雨束PKs基因所具有的高度保守区域“PIPKc”、“MORN repeat”.进一步分析表明AtPIP5K2基因在拟南芥根及莲座叶片中表达量较强,并且由于T--DNA的插入,使eto突构况苦半编慢变株系与野生型相比,其AtPI商的营就创验义P5K2基因过量革深又地减美表达,表明AtPIP5K2基因编码的产物可能参与调节拟又鲜她南芥适应盐胁迫的调节反应.

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