Bradford法测蛋白质浓度

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Bradford法测蛋白质浓度
一、实验原理考马斯亮蓝(CBB)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质—色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1000μg/ml,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。二、试剂配制
10ml标准蛋白溶液

浓度:1mg/ml牛血清蛋白配置:用十万分之一天平称取0.01g牛血清蛋白(98%)倒入10ml容量瓶中,用0.15MNaCl溶液定容至10ml,室温下充分混合溶解1小时,10000rpm离心半分钟,取上清液。
500mL染色剂

浓度:0.01%(w/v)G250,8.5%磷酸和4.75%乙醇配置:用千分之一天平称取0.05gG250于烧杯中,加入25mL95%乙醇,使用搅拌子搅拌,再量取50mL85%的磷酸溶液,最后去离子水定容至500mL。配好后用Whatman1号滤纸过滤。保存:在常温条件保存在棕色试剂瓶中三个月,但这段时间可能会出现染料的沉淀,所以每次使用前需混合均匀。二、保存条件保存:在常温条件保存在棕色试剂瓶中三个月,但这段时间可能会出现染料的沉淀,所以每次

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