请教外来自周血分单核细胞培养巨噬细胞的详细步骤

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【培养原理】
1.DC培养用细胞因子:
nGM-CS末药约角据微F(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子):
GM-CSF是一种造落张特们室天欢送弦杨今血生长因子,在体外可刺激中性粒细胞和巨噬细胞的集落形成,并具有促进早期红巨核细胞、嗜酸性祖细胞增殖和发成季游育的功能。GM-CSF是最早被鉴定出来对于DC有作用的细何设李既证重胞因子之一。

GM理混等过声-CSF在DC培养中松东硫春引的功能是促进单核细胞向大巨噬样细胞分化,细胞表设味官责尔行欢受面元面MHC II类分子的表达得以提高,从而增强细胞的抗原递呈功能。此外,GM-CSF还可促进DC的存活。

nIL-4 (白细胞介素-4源天再必紧初气群胡)
IL-4在由单核细胞诱导成DC的过程中发挥的作用是抑制巨噬细胞的过度生长,从而引导单核细胞向DC方向分化。若培养体系中不加IL-4,单核细胞将分化为巨噬细胞。同时,IL-4还有降低细胞表面表达CD14分子的能力。CD14表达水平的降低是单核细胞分化为D宜互情C的重要标志。

GM-CSF和IL-4共同作用可祖否粉封使单核细胞定向分化为未成熟DC(immature DC),此时的DC具有较强的抗原摄取和加安职丰吧工能力,但抗原递呈能力很弱。细胞表面中度表达MHC I类、II类剧易防史点动农起查拉叶分子和B7家族分子(风知铁CD80, CD86等),但不表达CD14。
nTNF-a (肿瘤坏死因子-a)

TNF-a可下调未成熟DC的巨胞饮作用和表面Fc受体的表达,使细胞内MHC II类分子区室(class II compartment)消失,但能械钱队者两货活宽够上调细胞表面MHC I类、II类分子和B7家族分子(CD80, CD86等)的表达,使未成熟DC分化为成熟DC(mature DC整伯斗板金春罪思研),此时DC的抗原摄取和加工能力明显减弱,而抗原递呈能力显著增强,可极强的激活T细胞。

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