1.1材料
1.1音底看联料益菌株和质粒大肠杆菌菌株DH5α为本室保存；酵母菌株INVSc1购自Invitrogen公司，其遗传型与表型Genotype:MET/METahis3△1/his3△1leu2/leu2trp1-289/trp1-289ura3-52/ura3-52Phenotype:His,Leu,Trp,***.phss6课待酵母-大肠杆菌穿梭质粒（在pHSS6的插入片段中含有mTn-3xHA/lacZ同源重组子）由美国Yale大学SnyderM教授惠赠。
1.2方法
1.2.1铺板，用敌50μg/mL卡那霉素或/和3μg/mL四环素筛选抗性克隆，37℃12~20略h。以LB洗下克隆，适半清识然球当稀释，部分以甘油冻存.适当稀释后，接种于50mLLB-50μg/mL卡那霉素和/或3μg/mL四环素，37℃培养6h至指数生长期。
1.2.2质粒的提取、纯化及检测常规方法中提或大提质粒，纯化质粒,电泳分析，紫外分光光度计OD260/280检测。部分经酒精沉淀保存。
1.2.3酵母转化取3μg纯化的质粒，经NotI内切酶消化(根据内切酶附说明书)，电泳，培养10mLINVSc1坏境酵母菌至指数生长期（30℃，问点密压视36~48h），OD600=1亚材向倍多确，离心收集细胞，以5mL转化缓冲液清洗压讨乙落把一次（转化buffer:0.2mol/LLiAC,40%PEG4000,100μmol/Lβ-ME(巯基乙醇)）。将细胞重新悬浮于1mL转化缓冲液中，含1mg变性鲑鱼精子DNA，混搞名帮银末转复假象茶财匀后，100μL/管旧油苦察争味束分装于新的Eppendorf管中，每管加入以NotI消化后的质粒D改卫守乐七市凯断贵含端NA0.5μg,彻底混匀后，于45℃，孵育30min。细胞经离心收集，悬浮于400μL的SC-ura,用200μL铺板，于30℃，2d。
1.2.4LacZ基因的表达为检测LacZ基因的表达，将克隆挑选出来，铺片于YPAD平板中，每板的密度为100个铺片。以无菌滤纸，将上述平板复制于另一SC-ura平板多齐位谓社判机做宪上，37℃过夜。将滤纸取出，克隆面朝上，置于一密闭容器中。容器底部加入10m算降汉始边L氯仿，10~30min。取出滤纸，克隆面朝上，置于X-gal平板（120gX-gal,0.1m山计门封视ol/LNaPO4(pH7),1mmol/LMgSO4,于1.6最%琼脂平板中），30℃,2d。查找X-gal阳性的克隆，从YPAD平板上重新挑取单克隆在SC-ura平板上，进行划板培养。将扩增的酵母菌种进行冻存保存（-80℃）。取LacZ表达最强的菌株进行大规模培养。 2.1转化株的SC-ura培养基上的生长情况由于发生同源重组后的转化子含有tetr抗性基因及酵母营养缺陷型选择标记Ura3，因此可以通过SC-ura或tetr该企套，选出我们所需的转化株。
2.2LacZ基因的表达
若插入片段与酵母基因组读码框相匹配，LacZ基因编码的β-半乳糖苷酶N端与宿主编码的C端结合，产生生物活性与X-gal反应，生成蓝色。
2.3酶切后的电泳图
纯化的质粒，经NotI酶解，应可见一条2.1kb左右的较均一的条带（载体守权站怎鲁妒液讨善pHSS6)和较不均的DNA插入片段条带（约8kb，含有mTn-3xHA/LacZ）。
