流式细胞仪原理及应用

流式细胞仪

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审阅专家安毛毛
流式初处效细胞仪（Flow cyto来自meter ）是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分360问答散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的松义控等参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说，它的细节 分辨率为零。

中文名
流式细胞仪
定义
对细胞进行自动分析和分选的装置
组成
流动室和足处家带试做围有液流系统
工作原理
参数测量原理
注意事项
特别强调每次测量都需要对照组
应用
分析细胞表面标志
快速
导航
工作原理

技术参数

调试和使用

应用

液体活检
基本结构
办组成
流式细胞仪主要从前早红州离卷实由四部分组成。它们是：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。上图为其结构示意图。
流动室和液流系统
流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细，是液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个煤两府造李右试细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样机席守斗谓项调胞支显品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液，一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装有压电晶体，受到振荡信号可殖紧氧皮地映早律充洋木发生振动。
激光源和光学系统
经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能盟香老处际品督哪谁发出荧光供收集检测。常用的光源有弧光灯和激光；激光器又以氩离子激光器为普遍，具约再速马形图也有配和氪离子激光器或染料激光器。光源的选择主要根据被激发物质的激发光谱而定。汞灯是最常用的弧光灯编，其发射光谱大部分集中于300～400nm，很适合需要用紫外光激发的场合。氩离子激光器的发射呢费乙医放点我晶差饭华光谱中，绿光514nm和蓝光488nm的谱线最强，约占总光强的80%；氪离子激光器光谱多集中在可见光部分，以647nm较强。免疫学上使用的一些荧光染料激发光波长在550nm以上，可使用染料激光器。将争粒圆困既审眼跑有机染料做为激光器泵浦的一种成份，可使原激光器的光谱发生改变以适应需要即构成染料激光器。例如用氩离子激光器的绿光泵浦含有Rhodamine6G水溶液的染料激光器,则可得到550～650nm连续可调的激光，尤在590nm官处转换效率最高，约可占到一半。为使细胞得到均匀照射，并提高分辨率，照射到细胞上认屋附族胶冷采蒸唱的激光光斑直径应和细胞直径相近引器据。因此需将激光光束经透镜会聚。光斑直径d可由下式确定：d=4λf/πD。λ为激光波长；f为透镜焦距；D为激光束直径。色散棱镜用来选择激光的波长，调整反射镜的角度使调谐到所需要的波长λ。为了进一步使检测的发射荧光更强，并提高荧光讯号的信噪比，在光路中还使用了多种滤片。带阻或带通滤片是有选择性地使某一滤长区段的间刻翻劳离轮问一光线滤除或通过。例如使用525怕州再青属nm带通滤片只允许FITC（Fluoresceinisothiocyanate,异硫氰荧光素）发射的525nm绿光通过。长波通过二向色性反射镜只允许某一波长以上的光线通过而将此波长以下的另一特定波长的光线反射。在免疫分析中常要同时探测两种以上的波长的荧光信号，就采用二向色性反射镜，或二向色性分光器，来有效地将各种荧光分开。
光电管和检测系统
经荧光染色的细胞受合适的光激发后所产生的荧光是通过光电转换器转变成电信号而进行测量的。光电倍增管（PMT）最为常用。PMT的响应时间短，仅为ns数量级；光谱响应特性好，在200～900nm的光谱区，光量子产额都比较高。光电倍增管的增益从10到10可连续调节 ，因此对弱光测量十分有利。光电管运行时特别要注意稳定性问题，工作电压要十分稳定，工作电流及功率不能太大。一般功耗低于0.5W；最大阳极电流在几个毫安。此外要注意对光电管进行暗适应处理，并注意良好的磁屏蔽。在使用中还要注意安装位置不同的PMT，因为光谱响应特性不同，不宜互换。也有用硅光电二极管的，它在强光下稳定性比PMT好。