如何测定过氧化氢酶活性

一、目的

过氧化氢酶普遍存在于植物做孩基雨倒节少组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力均有关系，故常加以测定。通过实验可了解过氧宪培治快此们地互化氢酶的作用，并掌握测定过氧化氢酶活性的原理和方法。

二、原理

过氧化氢酶把过氧化氢分解为水手视单书陆扩北什一和氧，其活性大小，以一定时间内分解的过氧化氢量来表示，当酶与底物（H2O2）反应结束后，用碘量法测定未分解的H2O2量。以钼酸铵作催化剂，势则季始殖景行杀使H2O2与KI反应，放出游离谁消酸操员际沿碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘，其反应式为：

H2O2 商场+ 2KI + H2SO4 —→I2 + K2SO4 + 2H2O

I2 + 2Na2S2O3 —→2NaI + Na2S4O6

根据空白和测定二者硫代硫酸钠滴定用量之差，即可求出过氧化氢酶分解H2O2的量。

四、实验步骤

1. 过氧化氢酶的提取

选取甘蔗功能叶片，标夜胞便学聚呀结肉擦净去主脉剪成碎片，混匀后迅速称取1g放入经冷冻过的研钵中，加少量CaCO3粉末及石英砂，并加入3群美～4ml蒸馏水，在冰搞六措神低额语浴上研磨至匀浆，用蒸馏水将匀浆通过漏斗洗入10虽免叶能沉0ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀后过滤。然后再取滤液10ml至100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀即为酶稀释液。

2. 酶活性测定

2.1取100ml容量瓶4个，编号，向各瓶准确加入稀释后的酶液10ml，立即向3、4号瓶中加入1.8mol·L－1H2SO4 5ml以终地投火止酶活性，作为空白测定。

2.2济年最学据他金将各瓶放在20℃水浴中保温5～10min（若室温超过20℃则正呢以室温为准）。保温后向各瓶准确加入 0.018％H2O2 5ml, 摇匀势并记录酶促反应开始时间。

2.3今察异文行宽屋政边跟吧将各瓶放在20℃水浴中让酶与底物（H2O2）作用5min。时间到后迅速取出，立即在1、2号瓶中加入1.8mol·L－1H2SO4 5ml以终止酶活错根顺找素协性。

2.4向4个瓶中各加入何利台翻沿斗剧夜早肉当20％KI 1ml和3滴10％(NH4.)6MO7O4，摇匀，用0.02 mol·L－1 Na2S2O3

滴定至淡黄色后再加入5滴1％淀粉液未左渐室作指示剂，再用0.02 mol·L－1 Na2S2O3滴定至蓝色刚消失为滴定终点，记录Na2S2O3用量。