辣根过氧化物酶的作用底物有哪些

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测酶活性的实验:
.用萃取化学公司法(amano法的改进型)测定葡萄糖氧化酶
(1)试剂

磷酸盐缓冲液(ph7.0):取6.805g磷酸二氢钾(kh2po4;
merck,
art.4873)溶于350ml蒸馏水中。用1m****溶液(naoh
(4g溶于100ml水))将ph值调至7.0,用蒸馏水定容至500ml。

邻-联二茴香胺(o-dianisidine)溶液:取1.7mg邻-联二茴香胺(c14h16n2o2;
serva,
nr,19175)溶于25ml磷酸盐缓冲液。

过氧化物酶(辣根过氧化酶,181u/mg)溶液(约0℃):取1.7mg过氧化物酶(serva,
nr,31943)溶于5ml蒸馏水。每毫升此溶液中应含有60个红紫倍精单位。

底物溶液(约0.55m):取5.0gβ-d-葡萄糖(c6h12o6;
sigma,
no.g-5250)溶于蒸馏水中,定容至50ml。
使用前,至少得将此酶静置3h。

酶(待测的葡萄糖氧化酶)溶液:用磷酸盐缓冲液溶解该酶。1ml配制的酶溶液中应含有大约0.1u。
0.0037g溶于500μl
pbs,
再取10μl前者溶液定容至100pbs(约0.1u/ml)。
测酶活性(118u/mg)的实验2
(1)操作步骤:将0.50mlβ-d-葡萄糖溶液、0.10ml在冰水中冷却过的过氧化物酶(辣根过氧化酶)溶液和2.4ml邻-联二茴香胺溶液滴入一只小烧杯内混合,调温至25℃,然后将其全部加到1cm的比色皿内,最后加0.1ml酶于待测的葡萄糖氧化酶溶液,同时按动秒表。在连续15min内每隔1min于436nm处测一次吸光度
(2)计算:用以下公式计算活性:
式中:e436――每分钟吸光度的变化(436nm处)(15次的平均值)
ew――0.1ml所用酶液中含酶的重量(0.000074mg)
8.3――1μmol邻-联二茴香胺/ml的吸光度(436nm处)
3.1――反应混合物的总体积
u1=53.25u/
mg;
u2=93.21u/
mg;
u3=13.30u/
mg
测酶活性(118u/mg)的实验5(061218)
(1)操作步骤:将333μlβ-d-葡萄糖溶液、67μl在冰水中冷却过的过氧化物酶(辣根过氧化酶)溶液和1.6ml邻-联二茴香胺溶液滴入一只1cm的比色皿内,调温至25℃,最后加67μl酶于待测的葡萄糖氧化酶溶液,搅拌均匀(搅拌同时计时,共用8s,),然后重新按动秒表。在连续15min内每隔1min于436nm处测一次吸光度
(2)计算:用以下公式计算活性:
式中:e436――每分钟吸光度的变化(436nm处)(15次的平均值)
ew――67μl所用酶液中含酶的重量(0.00004958mg)
8.3――1μmol邻-联二茴香胺/ml的吸光度(436nm处)
2.067――反应混合物的总体积
god:
15min的平均值:
u1=181.23u/mg;
u2=167.36u/
mg;
u3=156.11u/
mg
4min的平均值:
u1=156.56u/
mg;
u2=129.89u/
mg,
u3=134.97u/
mg

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