病毒5261名称:水稻矮缩病毒Rice dwarf virus(RDV)。
分类地位:4102植物呼肠孤病毒1653属Phytoreovirus,呼肠孤病毒科Reoviridae。
病毒异名:水稻矮化病病毒Rice stunt disease virus,水稻花叶病毒Rice mosaic v针范皇海力irus。
病毒的提纯:取RDV病株300g,剪碎,放于-70℃超低温冰箱中冷冻,取出后,加入900ml的0.1mol/L(pH7.0)磷酸缓冲液确待谁房州松派绍质(内含0.01mol/LMgCl2溶液),置绞肉机中研磨数遍,4层纱布过滤去渣,5500g离心10织机概侵待延么断请官min(JA-14转头,J2-21BECKMAN菜棉否影沙危除假率换河离心机,下同);弃沉淀,续精持若传亲价取上清液,加20%四氯化碳,搅拌1min(10000r/min),使其尽量乳化,5500g离心10min;弃沉淀,取上清液,加6%的PEG、0.3mol/LNaCl,置冰箱中搅值评提离也异州拌60min,9000g,15min;取督身字胜末界贵燃角沉淀,用60ml的0.1mol/L磷酸缓冲液悬浮,用匀浆器充分匀浆,5000g,10min(JA-20转头);弃沉淀,取上清液,加烈病培知强6%PEG、0.3mol/LNaCl、1众曲足载里执此怕压%Triton,置冰箱中搅拌扩护存华每照诉置省60min,900引少序笑0g,15min;取沉淀,用少量的0.01mol/L磷酸缓冲液再悬浮,5000g,10min(JA-21转头);取上清液,630000g,界轻又照克40min(Type80转头,BECKMANL7-80练推晶支超速冷冻离心机);取沉淀,加2ml0.01mol/L磷酸缓冲液,再悬浮,5000g,10min;取上清液,经10%~40%蔗表析岩弱穿州确岁类读糖密度梯度(SDG)离心,79000g,45min(SW40Ti转头);取病毒带,加40%~60%SD交G,79000g,6h;取病毒带,63000g,60min;取沉淀,加1ml0.01mol/L磷酸缓冲液再悬浮,5000g,10min,上清液即为病毒制剂(吴祖建,1996)。
病毒理化特性:
①病毒粒子:为等轴球状,无包膜,直径70nm左右,具双层衣壳,沉降系数5现似方体银划10S,主要存在于病叶的褪附费晶百张带绿细胞或介体昆虫的脂肪体、马氏管、中肠上皮细胞、唾腺、卵巢管、血球、含菌体、气管、肌肉和表皮细胞中。
②核酸:含量11%,双链RNA(dsRNA),为12个dsRNA片段,总分子质量17*106u。
③蛋白:有6种结构蛋白,分子质量分别为210、185、165、120、60和46ku。
株系:国外报道有强毒株系及一个介体不传播的株系(Brunt etal.,1996)。在日本有RDV的普通株系和严重株系之分。我国徐承业等(1979)通过六个地理来源不同的RDV毒株与三个品种交互反应和南昌黑尾叶蝉对不同RDV毒株的亲和力观察,初步认为RDV存在致病力不同的株系。吴祖建(1996)以RDV福州分离物同日本的普通株系及严重株系进行比较研究,在症状表现、传毒特性、血清学关系以及双链RNA和蛋白组分的电泳迁移率上均有差异。