氨基酸的序列决定来自了蛋白质的分子构造和功能,请阐明至少两种分析决定氨基酸序列的方法及其原理,并比较说明这些方法的优缺点。

氨基酸的序列决定了蛋白质的分子构造和功能,请阐明至少两种分析决定氨基酸序列的方法及其原理,并比较说明这些方法的优缺点。
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①Edman化学降解法360问答,又称苯异硫氰酸酯法。多肽或蛋白质的末端氨基能与PITC(称Edman试剂)作用,生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质,后者在酸性有机溶剂中加热时,N-末端的PTC-氨基酸发生环化,生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来,除去N-末端氨基酸后剩下的执斤鱼称乱席诉逐肽链仍然是完整的。剩下的肽可反百待设式宣看伯玉复进行上述处理,依次生成各成古阳儿游种PTH-AA,经有机溶剂抽提干燥后,可经层析进行鉴定。特点:一次可测出60~70个氨基酸残基组成的肽。测序速度较慢;样品用量较大;对样品纯度要求很高;对于修饰氨基酸残基往往会错误识别,而对N-末端保护的肽链则无法测序。②质谱法:可分析微量的肽链,短肽在第一台质谱仪中经电喷射电离,按荷质比分离,依次在经碰撞池被裂解成离子应急碎片,在第二台质谱仪中测出各个离子碎片的谱线,推算出短肽的氨基酸序列。在蛋白质组学中应用广泛,但不能区分亮氨酸和异亮验员刻教频在治氨酸。特点:灵敏度高,所需的样品量少,测定速度快,但仅限于一些较短的序列(一般不以基绝改超过15个氨基酸残基)。

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