一抗来自是小鼠单克隆抗体,2抗一定要用抗小鼠的吗

是的。这个一定是的。不然二抗就不能和一抗结合啊。
不过也有用 HRP标记的protein a或g的，前提是你跑的样里没有IgG之类的东西。