实验细胞的活力测定MTS法

BrdU标记法 1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。 2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。 3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。 4．甲醇/醋酸固定10min。 5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。 6．5％正常兔血清封闭。 7．甲酰胺100℃，5min变性核酸。 8．冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。 9．按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。 结晶紫法 1．体外细胞培养结束后，去培养液，加入11％的戊二醛固定，置于振荡器上摇20min。 2．固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。 3．置空气或烘箱37℃彻底干燥。 4．加入0.1％的结晶紫液对细胞染色，振摇30min。 5．用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫液冲洗干净。 6．置空气或37℃烘箱中彻底干燥。 7．加入10％的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。 8．1h后在酶标仪上测定光吸收度，波长595nm。 酸性磷酸酶法 1．96孔细胞培养板中培养细胞，去培养...