1,
凝胶制备:
用两块电泳玻璃板制成垂直板槽(不能漏胶),垂直放置。将配制好的分离胶溶液,倒入,滴加入无离子水,待凝胶具聚集后,倒出无离子水,用吸水纸吸干,倒入浓缩胶,再插入梳子。
2,
上样:
分别取样品若干ml于离心管中,按1/1-1/5比例加入5×样品缓期溶二抓冲液,再沸水浴中加热3-5min,取出待用。用微量注射器分别吸取不超过30ul不同浓度的标准蛋白样品和试验样品注入样品槽。点样结束后,调节电泳员德既副础微起立周晚雷仪电流到10mA(2-3mA/em),保持电流稳定不变,当溴酚蓝迁移到离分离胶底1-2cm时,即可停止电泳。
3,
染色:
电泳完毕后,取出凝胶板几乙按历政,浸入染色液中,在37℃温箱中保温过夜。倒掉染色液,24h后,即可看到清晰的蛋白质条带。
四、结果
(略)
五、注意事项
1、
SDS与蛋白质的结合按质量成比例(即:1.4gSDS/g蛋白质),如果比例不当,就不能得到准确的数据。
2、
用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时,必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线优空方民育交进第哥训金作为下次用。
3、
有些蛋影利连严并计心伤白质由亚基(如血值思品权许大怕穿状史越红蛋白)或两条以上肽链(α-胰凝乳蛋白酶)组成的,它们在巯基乙醇和SDS的作用下解离成亚基或多条单肽链。因此,对于这一类蛋白并师径质,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电季冷晚义何却培北泳法测定的只是它们的亚基或是单条肽链的相对分子量。
4、
有的蛋白质(如:电荷异常或结构异常的蛋白质;带有支较大辅基的蛋白质)不能阻周手针验画采用该法测相对分子量。
5、
如果该电泳中出现拖尾、染色带的背景不清晰等现象,可能是SDS不纯引起。