磷酸化蛋白WB究竟注意哪些条件

磷酸化蛋白WB有很多注意条件
比如：
一定要在lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂，否则即使条带压出来也会很浅，结果也不可信。
加一抗后最好4度过夜，保证抗体有充分的结合时间。因为磷酸化的蛋白只占总的蛋白量的极少部分。4 度也可使一抗重复使用多次。
磷酸化抗体的好坏是一个关键因素，所以要选择好的厂商。
最好根据厂商的protocol来操作实验，这是实验成功的保证。
抗体的稀释倍数也要适当，不同厂商也会有不同要求。