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内容来自用户:chuqiqi19
质粒载体单酶切后的去磷酸化
1、去磷酸化体系的确定：
一般有两种体系：20ul体系和50ul体系
ddH2O X to 20ul
SAP buffer 2ul
SAP 1ul（一般0.05-2μg的DNA用1ul的SAP足够）
质粒载体m ul [m=（0.02nmol*质粒大小kb*660）/质粒浓度]
2、反应条件：
37℃反应30-60min
65反应15-30min（灭活SAP）
用1X TE将去磷酸化后的载体补足300ul（为了下一步纯化载体时减少损失）
载体纯化（个人不建议用胶回收柱纯化，因为纯化的效率很低，除非你的载体浓度很高或者你的柱子效率很高。建议使用酚氯仿纯化DNA的方法纯化载体）
加入酚：氯仿：异丙醇（25:24:1）300ul充分混匀10min左右
8000rmp离心5min，分层后小心吸取上清于新离心管（千万不要吸到中间层，宁肯少吸点上清）
加入300ul异丙醇于上清中，充分混匀
8000rmp离心5min，小心倒去上清（一般载体纯化是看不到底部沉淀，但并不表示没有载体沉淀下来）
加入300ul70％乙醇洗涤沉淀
8000rmp离心5min，小心倒去沉淀，室温晾干5min,加20-50ul 1XTE溶解载体。最后测浓度准备下一步连接体系的建立
以下为转载前辈的去磷酸化方法，共大家参考：
对单酶切后的产物去磷酸化是指5‘端的磷酸基团，（3’端是-OH）。用CIAP去磷酸化，它能将载体单酶切过夜，然后
