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回答者：网友
肠菌群测定操作细则
肠菌来自群系指群能发酵乳糖、产酸李作朝孩县季产气、需氧兼性厌氧革兰氏阴性芽胞杆菌官该菌主要于畜粪便,故作粪便污染指标评价食品卫质量,推断食品否污染肠道致病菌能
食品肠菌群数系10360问答0mL(g)检内肠菌群能数(MPN)表示
1 设备材料
1.1 温箱:36±1℃
1.2 冰箱:0~4℃
1.3 恒温水浴 :44.5±0.5℃
1.4 平
1.5 显微镜
1.6 均质职器或乳钵
1.7 平皿:直径90mm
1.8 试管
1.9 吸管
1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量500mL
1.11 玻璃珠:直径约5mm
1.12 载玻片
1.13 酒精灯
1.14 试管架
2 培养果激基试剂
2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.284.9规定
2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 帮针略酒学散4789.284.25规定
2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.284.10规定
2.4 EC 肉汤:按GB 4789.284.11规定
2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.283.22规定
2.6 理盐水
2.7 革兰氏染色液:按GB 4789.282.2规定
3 操作步骤
3.1 检稀释
3.1.1 菌操作检25mL(或g)放于225mL灭菌理盐水或其稀释液灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适数量玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充振摇或研磨做1:10均匀稀释液固体检用均质器,8 000-10 免按继整免控棉吸000 r/min速度处理1m群永蛋陆及理该复in,做1:10均匀稀释液
3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含9mL立脸皮通含深灭菌理盐水或其稀释液试管内,毫顺上使帮财振摇试管混匀,做1:100稀释液
3.1.3 另取1mL灭菌吸管,按条操作依做10倍递增稀释液,每递增稀释,换用1支1mL灭菌吸管
3.1.4 根据食品卫标准要求古老稳或检污染情况估计,选择三稀释度,每稀释度,接种3管
3.2 乳糖发酵试验
待检品接种于乳糖 胆盐发粉分未内木例批酵管内,接种量1mL者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及1mL者,用单料乳糖胆盐发酵管每稀释度接种3管,置36±1℃ 温箱内,培养战队刚随养去滑短思结24±2h,所乳糖胆盐发酵管都产气,则报告肠菌群阴性,产气者,则按列程序进行
3.3 离培养
产气发酵管别转种伊红美蓝琼脂平板,置36±1℃ 温箱内,培养18-24h,取,观察菌落形态,并做革兰氏染色证实试验
3.4 证厂纸零预况笔气持根单各实试验
述平板,挑取疑肠菌收某的另光乱续异款职达群菌落1-2进行革兰氏染色,同接种乳糖发酵管,置 36±哪群1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况凡乳糖管产气、革兰氏染色阴性芽千脱力田混胞杆菌,即报告肠菌群阳性
3.5 报告
根据证实肠菌群阳性管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)肠菌群MPN值
4 粪肠菌群(faecal coliform)
冷长实美载离4.1 用接种环所产气乳糖胆盐发酵管培养物(见3.2条)转种于EC肉汤管内,置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内水面应高于EC肉汤液面),培养24±2h,经培养,所EC肉汤管均产气,则报告阴性;产气者,则所产气EC肉汤管别转种于伊红美蓝琼脂平板,置 培养18-24h,凡平板典型菌落者,则证实粪肠菌群阳性
4.2 结报告
根据证实粪肠菌群阳性管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)粪肠菌群MPN值
若较典型肠菌群菌落革兰氏染色阴性即直接判定阳性
若少或均够典型应挑选菌落作证实实验免现假阴性
SN/T 1897-2007食品菌落总数测定用于与食品接触设备表面附录A
另自定
例:
物体表面采及检查
采面积
采表面＜100cm2取全部表面;采表面≥100cm2取100cm2
采
用5×5cm2标准灭菌规格板;放检物体表面用浸菌理盐水液棉拭1支规格板内横竖往返各涂抹5;并随转棉拭于连续采1~4规格板面积;剪手接触部棉拭于放入装10ml采液试管送检门手等型物体则采用棉拭直接涂抹物体采
培养(略)
