(20分)(2018·南京高二检测)嗜热菌可以生活在98 ℃的高温环境中,研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关...

(20分)(2018·南京高二检测)嗜热菌可以生活在98 ℃的高温环境中,研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。如图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程,其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA↓TATG、G↓AATTC、A↓AGCTT、G↓TCGAC。请分析回答:(1)图中的结构A是______________________________________,其主要作用是____________________________________________。一个完整的基因表达载体组成,除了质粒1中所示结构以外,还应该含有________________。 (2)用图中质粒1和H基因构建重组质粒,应选用________________两种限制酶进行切割。 (3)实验中发现,重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低,但在含有质粒2(辅助性质粒)的细胞中,H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌,应在筛选平板培养基中添加____________。 (4)PCR反应中引物的设计非常关键,据图分析,扩增H基因时应选择的一对引物是________________。 A. 引物Ⅰ:…GGGAATTC…;
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(1)启动子 提供RNA聚合酶特异性识别结合位点 目的基因、终止子和复制原点

解析:

引物Ⅱ:…CTCATATG…

B.引物Ⅰ:…GAATTCCC…;

引物相压缺教走量南解律Ⅱ:…CATATGAG…

C.引物Ⅰ:…GGAAGCTT…;

引物Ⅱ:…AAGCTTCC…

D.引物Ⅰ:…CTCATATG…;

物Ⅱ:…AAGCTTAAGCTT…

本题结合基因结构图和载体结构图,考查基因工程的技术和原理,重点是限制酶和DNA连接酶。解答本题的关键是熟记并理解基因工程的基本操作程序来自并形成清晰的知识网络。

(1)据题图分析,统娘久束件各势灯八热财由质粒1和重组质粒上都具有A可推知,A是启动子,其作用是提供RNA聚合酶特异性识别结合位点,间和云乙春头答当后飞代驱动基因转录。一个完整的基因表达载体组成包括启能兰记好备民城角误凯动子、终止子、目的基因、标记基因和复制原点。

(2)结合四种限制酶的识别序列和酶切位点,用图中质粒1和含H基因的DNA构建重组质粒,应选用NdeⅠ、EcoRⅠ两种限制酶进行切割。

(3)对两百空看运元聚评代富种质粒的标记基因进行分析后可知,质粒1上含有抗生素A的抗性基因,质粒2上含有抗生素B的抗性基因,所以应在筛选平板培养基中添加抗生素A和抗生素B。

(4)分析切割效准还持端画科停使质粒和目的基因的两种限制酶NdeⅠ、EcoRⅠ的识别序列和切割位点,发现A、B选项的引物Ⅱ中有NdeⅠ的识别序列CA↓TATG,而A、B选项的引物Ⅰ中都有EcoRⅠ的识别序列G↓AATTC,而C、D中都不含,所以应选择A、B。


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