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本文采用透明圈平板筛选、单因子及多因子正交试验、超滤浓缩、Sephadex G-100凝胶层析、SDS-PAGE等方法,从现有菌种资源筛选出一个产木聚糖酶菌株,并对该菌株的适宜发酵条件、产酶规律、分离纯化方法和酶学特性进行了初步研究,得到电泳纯木聚糖酶样品,为木聚糖酶的工业化生产和应用提供了科学依据。通过本实验得出以下结论: 1、从现有菌种资源中筛选出1个高产木聚糖酶的Erwinia carotovora变异菌株(编号CXJZ11-01); 2、获得该菌株适宜生长和发酵培养基最佳配方;以蛋白胨作为该菌株发酵培养基的碳源,发酵8.0h即出现产酶高峰,发酵液酶活达到344U/ml。 3、变异菌株CXJZ11-01所产木聚糖酶最佳测定体系:0.1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液;pH5.8;以木聚糖为底物,浓度0.8%;温度60℃;DNS量2.0~2.5ml;显色时间5min;测定波长540nm。 4、变异菌株CXJZ11-01所产木聚糖酶优化分离条件为:50kD、10kD、5kD膜包超滤浓缩及Sephadex G-100凝胶层析。木聚糖酶的纯化倍数为13.25,收率为45.4%,通过SDS-PAGE得到单一条带,测定其分子量为29.3kD。 5、变异菌株CXJZ11-01所产木聚糖酶的酶学性质为:稳定pH范围3.4~6.4,酶的作用pH范围4.0~7.0,最适pH5.8;该酶的热稳定温度在60℃以下,适宜温度范围是35~60℃;Fe2+、Co2+和Mn2+对木聚糖酶有激活作用,Cu2+对木聚糖酶有强烈的抑制作用,酶液在2mmol/L的Cu2+溶液中保存12h,酶活损失93%;以燕麦木聚糖为底物,Km为0.5mg/L,Vmax为33.31μmol/(min?ml)。
