感受态细胞的制备

感受态细胞的概念

感受态，指的是细菌在一定的条件下可以吸收外部环境中的DNA的一种生理状态，它是由受体菌的遗传性状所决定的，同时也受菌龄、外界环境因子的影响。细胞的来自感受态一般出现在对数生长期，新鲜幼嫩的细胞是制备感受态细胞和成功转化的关键。

AGL1感受态细胞

实验原理：

目前,感受态细胞的制备常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备,即用低渗CaCl2溶液在低温（0℃）时处理快速生长的细菌,从而获得感受态细菌.此时细菌膨胀成球形,外源DNA分子在此条件下易形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附在细菌表含团飞确又息连本径面,通过热激作用促进细胞对DNA的吸收.转化效率可达106-107转化子/微克DNA。

注意：本方法的关键是选用的细菌必须处于对数生长期,实验操作必须在低温下进行。

具体操作：

1、取-70℃冰冻菌种,见女常配置皇杂何明计民用划线法接种细菌于培养皿,做好标记,于37℃培养过夜。

2、第二天,从平板上挑取单个菌落,接种至含有3mlLB培养液的试管中,37℃振荡培养过夜.次日取菌液1ml接种至含有100mlLB培养基500ml烧瓶中,37℃剧烈震荡培养约2~3小时（200~300r/min）。

3、当菌落600nmOD值达到0.3-0.4时,将烧瓶取出放置冰上10~15分钟.在无菌条件下把菌液倒入50ml离心管中.4℃,4000g离心10分钟。

4、弃上清,将管倒置于干滤纸上1min,吸干残留的培养液.加10ml0.1MCaCl2到离心管细不参四被品银事论中,振荡混匀,悬浮菌体,冰浴30分钟。

5、4℃,4000g离心10分钟,弃上清,将管倒置于干滤纸上1360问答min,吸干残留的培养液.加4ml冰预冷短住题的0.1M的CaCl2,重悬浮菌体.每管0.2ml分装,至4℃保存备用,24-48小时内使用效果较好.如果暂时不用,可再保存于-70℃的低温冰箱中。