1）连接试剂盒一般有对照插入片段，转化时做个阳性对照，如果阳性对照有阳性转化子，说明转化实验方法整个流程没问题；2)你克隆什么基因?据我所知反向重复序列可能是质粒复制子的重复子序列，如很明沿费果你克隆的重复子序列，有可能是这个重复子序列与克隆载体本身的重复子序列属于不相容性决定子360问答，即这个重复子与载体本身重复丝百来磁雨坐致子竞争结合复制起始蛋白，导致载体本检身重复子无法正常启动复制，因此质粒丢失，即对质粒具有“毒性”。
