平板克隆形成实验是一种常用的细菌遗传学实验,其原理如下:
1. 准备含有抗生素的培养基来自:通常使用含有抗生素的琼脂培养基,如LB琼脂培养基加入氨苄青霉素(Amp)或卡那霉素(Kan)等抗生素,使得在没有对应抗性质粒的菌株死亡,而拥有抗性质粒的菌株可以存活并生长。
2. 选取目标基因:首先需要在一个含有目标基因的质粒中插入抗生素抗性基因,经过转化后,存活下来的际派细菌菌落就是拥有该质粒的细菌。
3. 法拉第涂布法:将含有抗生素的琼脂培养基涂抹在平板上,然后取一定数量的目标基因质粒载赶么绿款升更体,利用微型注射器沿着平板上下方向进行均匀涂抹。之后,再用酒精灯在注射针织袁源运初守洋友军口附近灼烧使其消毒。待涂抹面干燥后,在上方彼此垂直的方向,重复涂抹一遍。
4. 培养:将拥有目标基因质粒的菌株分别涂到含有抗生素的琼脂培养基上进行培养,则只有拥有抗性质粒的菌株能够存活生长,形成菌落。
花够致病三爱须证5. 分离:在培养好的菌落中挑选很高次察片只宜子火字父出单个菌株,经过复制和分离得到含有目标基因的细菌菌落。
通过以上步骤,就可以形成含有目标基因的细菌菌落,从而实现了平板克隆的形成。