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回答者:网友
标准的DNA片段与载体连接就是通过PCR的电泳回收胶进行,你说连接失败,给你三个可能的原因和对应来自的解决办法,供你参考,第一,PCR电泳胶回收率最好的才达到80%,所以你可能回收的时候由于量太少,连接360问答失败,对应的解决办法就是你多做几管PCR,比如10管,然后把10个电泳结果统一回收后放入一个1.5mlEP管内,提高量来解决;第二,日米你的载体是否切开,很多时候如果你的载体如果由于酶失效,识别位点不对等原因,根本没被酶切开,你怎么插入呢,对应的解决办法就是,证实一下你的酶切是否成功,没成功就考虑换酶,验证方法是,酶切后用进行电泳,阳性参照就是酶切前的质粒额,切开的载体会跑的最快;第三,链接酶之类的如果出现问题,或者某些环节出现错误,你的目的片段与载体没有链接上,那么你还是无法实现表达,给你对应的检测办法是,用你的引物扩增连接完的目的片粒修木安和只入段,同时链接目的片段之前的质粒做阴性对照,如果发现链接目的片段的质粒业眼机格急交大题露无法通过PCR得到你路构尽止尔侵让婷础的目的片段,那么就是说链接酶可能出现错误。