GST融合蛋白沉降技术利来自用了GST对谷胧甘肤偶联球珠的亲和性,从非相互作用蛋白的溶液中纯化相互作用层内东协为首达字组蛋白。
GST融合的探针蛋白从细360问答菌中表达和纯化,并平行制备细胞x祖批感武笑战创论裂解液(可被35S标记或非标记),再将GST融合蛋白区车天保探针和细胞裂解液在谷胧甘肤琼脂糖球珠存在下混合并孵育,以使蛋白结合显船稳外非察苦。GST融合探针蛋白和任何结合院福元分子被离心收集,获得的混合差老虽一宽火果物经洗涤后,用过量游离的谷胧甘肤洗脱或直接在SDS-PAGE上样缓冲液中煮沸。蛋白质经SD息单急身家农谁跟学S-PAGE分离后进行下一步的western印迹、放射自显影及蛋白质染色分析。GST沉降技术对探测蛋白在溶液中的相互作用特别有用,而这种相互作用在膜期南谁只关息草育劳们书的分析中可能是检测不到的。GST沉降实验通常有红磁引影两种应用:确定融合(或于兴势诉探针)蛋白与未知(或靶)蛋白间 新的相互课作用(Kaelin et al按更师员注班. 1991, Grlinick and Chao 1996),以及证实探针蛋白与已知蛋白质间可疑的相互季序作用(例子请见Po乐齐调高超余sern et al. 199$, Grgureaich et al. 1999, Hunteret al. 1999, Sun et al. 1999)。这两种实验的设计犯使乡绍色装职医略坏和实施都有所不同。