在dna测序的时候在开始的阶段出现了很多的aaa然后再后面的峰就比较小了 为什么 我用的是m13f 做的引物
但是我在很前的部分就出现poly a 了 我听老师说让我用m13r去从新做一下 为什么我是先用mrna 反转录出cdna 然后race pcr 在进行克隆 克隆结束后开始的测序 我是用的oligo d(t) 为什么有些的就能测到序列 有些出现了大约15个左右的a
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这个,取决于你所测的片段的来源吧。 Poly A很可能是RT-PCR中使用了Oligo d(T)的结果,当然也可能是DNA片段本身就含有一部分连续的A,还可能是测序公司的失误。 你应该使用的是PCR后连接载体后扩增出的重组质粒进行测序的。这样M13F是从一侧对插入片段进行测序。这边如果有问题,那么就可以使用M13R,也就是另一侧进行测序。这样就可以避开那段Poly A,让测序结果更加可信一些。 说实话,你的问题中信息太少,很难做出太准确的回答。
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原因在poly结构后,测序酶容易在模板上滑动,导致poly结构后的信号衰减,峰型变得杂乱。
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