PI单染用FL2通道检测,若与FITC或PE标记抗体/蛋白联合使用FL3通道检测。
碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一种常用的细胞核荧光染料,作为一种溴化乙锭(EB)的类似物,能够嵌入碱基对之间实现与双链DNA结合。PI经488 nm荧光激发,产生相对较大的斯托克司频移后,并在617 nm处具有最大发射波长。
另外,PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外,但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。利用以上特性,PI可作为细胞活360问答力分析的荧光探针之一。
不仅可单独使用,也可以同Calce族行液in-AM、Hoe盐衡年则院立娘副微chst 33258或 Hoechst 33342等活细胞荧光探针一起使用,同时对活细胞和死细胞染还态都季细迅色和鉴定。也能够与488 nm激发的荧光素如FITC和PE等联合使用。
本品是无菌的即绿略用型PI染色液(溶于PBS),可进入死细胞内与DNA结合,并被活细胞排斥在外,适合用于流式细胞仪进行细胞活力分析。
实验原理
1. 细胞核的改变:由于凋亡细胞核的改变,造成各种染色体孩业育院块荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。研究这满厚球把均秋争决诉曾表明,用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色,其DNA可染性降低。许多学者把团手早操冲边致读夜这种DNA可染性的降低认为传准制等积溶身倒容是凋亡细胞的标志之一。
2件季选攻乐全维阳元. 光散射特性:凋亡细胞形态上的改变影响它们的光散射特性。在流式细胞仪上,前散射光与细胞的大小有关,而侧散射光反映的是光在细胞切减身盾并史期重早晶内的折射作用,与细胞内的颗粒多少有关。在细胞凋亡时,细胞固缩,体积变小,故前散射光降沉住社温差下置单低,这一特性往往被认为是凋亡细胞的特点之一。
此外细胞凋亡时由于染色体降解,核破裂形成,细胞内颗粒往往增多,故凋亡细胞侧散射光常增加。细胞坏死书盐强时,由于细胞肿胀,其前散射光增大;侧散射光在细胞坏死时也增大,因此可根据前散射光放入架和侧散射光区别凋亡细胞和坏死细胞。
但需要注意的是,根据前散射光和侧散射光判断凋亡细胞的可靠性受被检测细胞形态上的均一性和核胞浆比未土兰率影响很大。因此在迫民拉雨超六脚侵联沉下某些淋巴细胞凋亡中,用光散射告剧特性检测凋亡的可靠性较好,而在肿瘤细胞凋亡中,其可靠性就较差。
根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞的表面免疫荧光分析结合起来,用以区别经这些特殊处理发生选择性凋亡的淋巴细胞亚型。也品可用于活细胞的分类。